Zwiększony obrót DC do węzłów chłonnych i nadwrażliwość kontaktowa w myszach z niedoborem cząsteczki adhezyjnej A z adhezją ad

Analiza FACS JAM-A na mysich leukocytach izolowanych z jamy otrzewnej 24 godziny po wstrzyknięciu tioglikolanu. Ekspresja JAM-A na komórkach śródbłonka pochodzących z płuc Jam-A + / + i Jam-A. zwierzęta oceniano za pomocą FACS, immunoprecypitację i analizę Western blot z mAb BV12. W C i D, szare linie reprezentują negatywne kontrole uzyskane za pomocą samego drugorzędowego Ab. Międzyplon heterozygotycznych myszy dla Dżam-A. allel generował heterozygotyczne i homozygotyczne potomstwo we właściwych proporcjach Mendla. DNA wyizolowany z biopsji ogonowych wykorzystano do genotypowania zwierząt. Różne kombinacje flox JAM-A i / lub Jam-A. allele zidentyfikowano za pomocą PCR stosując startery TS512 i TS379 i LoxP startery TS447 i TS444, jak pokazano na Figurze 1B. Nieobecność JAM-A potwierdzono analizą FACS leukocytów (Figura 1C), analizą Western blot, analizą FACS komórek śródbłonka (Figura 1D) i analizą histologiczną różnych narządów (Figura 2). Podczas autopsji zmutowane myszy nie wykazały istotnych zmian w rozwoju narządu lub morfologii. Liczba krążących płytek krwi, limfocytów, krwinek białych obojętnochłonnych i monocytów nie uległa istotnej zmianie w przypadku dżemu-A (3). zwierzęta w porównaniu ze zwierzętami Jam-A + / + (nie pokazano). Ponadto, układ naczyń krwionośnych (krezka, skóra ucha) u dorosłych nie różnił się istotnie w Dżam-A. /. myszy w porównaniu z myszami Jam-A + / + ocenianymi jako średnia średnica naczyń lub liczba gałęzi na jednostkę długości (nie pokazano) (14). Podstawowa i indukowana przepuszczalność naczyń w uchu, mierzona jak opisano (15), nie była znacząco zwiększona w Dżem-A (3). myszy w porównaniu z myszami Jam-A + / +. Rycina 2 Analiza histologiczna dżemu-A. /. i śródbłonkowy Jam-A. /. myszy. (A) Barwienie immunofluorescencyjne seryjnych kriosekcji Jam-A + / +, Jam-A (3 i śródbłonkowego Jam-A (3). (Nerki Tie-2 Cre Jam-A (3) z użyciem przeciwciał anty-PECAM i anty-JAM-A (BV12). Wszystkie sekcje wykazują pozytywne barwienie dla PECAM (zarówno kontroli jak i mutantów), podczas gdy barwienie JAM-A jest niewykrywalne we wszystkich typach tkanek w Dżam-A. /. myszy. Należy zauważyć, że komórki śródbłonka z Tie-2 Cre Jam-A. /. zwierzęta są negatywne pod względem barwienia JAM-A (strzałka). Groty wskazują, że nadal można wykryć zabarwienie JAM-A na nabłonku kanalika. Barwienie jest słabsze w porównaniu z myszami Jam-A + / +, ponieważ kapilary okołonaczyniowe są ujemne. Pasek skali: 200 .m. (B) Immunobarwienie seryjnych kriosekcji aorty z Jam-A + / + i Tie-2 Cre Jam-A. /. myszy, stosując przeciwciała anty-PECAM i anty-JAM-A (BV12). Naczynie śródbłonkowe naczyń JAM-A jest niewykrywalne w Tie-2 Cre Jam-A. /. aorta. Pasek skali: 200 .m. (C) Cryosections of Jam-A + / + i Tie-2 Cre Jam-A. /. węzły chłonne były podwójnie wybarwione dla LYVE (na zielono), marker limfatyczny komórek śródbłonka i dla JAM-A (na czerwono). U myszy Jam-A + / + widoczna jest kolokalizacja JAM-A i LYVE; tego nie zaobserwowano w Tie-2 Cre Jam-A. /. Zwierząt. Pasek skali: 50 .m. Aby zbadać rolę JAM-A specyficznie wyrażaną na komórkach śródbłonka w regulacji migracji DC, zastosowano podejście genetyczne. Przeszliśmy (patrz: Metody) myszy, które zawierały dwa zmutowane allele JAM-A z heterozygotycznymi myszami transgenicznymi (Jam-A + / a) eksprymującymi Cre pod swoistym dla śródbłonka promotorem Tie-2 (16). Poprzez barwienie immunofluorescencyjne (Figura 2, Ap), JAM-A był niewykrywalny zarówno w naczyniowych i limfatycznych komórkach śródbłonka, ale zachował swoją normalną ekspresję w komórkach nabłonka. Identyfikację genotypów Cre-2 Cre-dodatnich przeprowadzono za pomocą starterów Tie-2 Cre, jak pokazano na Figurze 1B. Aby odróżnić heterozygotyczny Jam-Aflox /. oraz myszy Jam-Aflox / + zastosowano startery TS379 i TS512. Zwiększona pojemność migracyjna Jam-A. /. DCs. Wcześniejsze badania wykazały, że JAM-A ulega ekspresji w komórkach mielomonocytowych, a także w komórkach śródbłonka, gdzie został pierwotnie zidentyfikowany (1). Te obserwacje rozszerzono na mysie (Figura 3A) i ludzkie (nie pokazane) DC. Wyjściowe DC pochodzące z szpiku kostnego (BM-DC) eksprymowały JAM-A, a jego poziomy nie uległy istotnemu wpływowi ekspozycji na TNF-a, klasyczny sygnał dojrzewania (Figura 3A). Dlatego ważne było zbadanie, czy niedobór JAM-A wpływał na funkcję DC. Niedojrzały i dojrzały Jam-A. /. DC były podobne do Jam-A + / + DC pod względem fenotypu błonowego (Figura 3B), mieszanej odpowiedzi limfocytowej (Figura 3C) i wychwytu FITC-dekstranu (Figura 3D). Figura 3 Charakterystyka DC z Jam-A + / + i Jam-A. /. myszy. Komórki prekursorowe szpiku kostnego CD34 + użyto do wytworzenia iDC i mDC in vitro, które zostały funkcjonalnie scharakteryzowane zgodnie z opisem w Metodach
[więcej w: makijaz permanentny cena, ubezpieczenia zdrowotne prywatne, bytovia hpu ]
[przypisy: chusteczki antybakteryjne, błonnik witalny opinie lekarzy, narodowy fundusz zdrowia sanatorium ]
[więcej w: chusteczki antybakteryjne, błonnik witalny opinie lekarzy, narodowy fundusz zdrowia sanatorium ]