Wydalanie ludzkiej mitochondrialnej deformylazy peptydowej, nowy cel antyrakowy antybiotyków na bazie aktynoniny ad 5

Wielkość depolaryzacji przy najwyższej dawce (100 .g / ml) jest równa kontroli pozytywnej, cyjankiem karbonylu m-chlorofenylohydrazonu (CCCP), jonoforem protonowym, który nieodwracalnie odbiera oddychanie (31). Kinetyka efektu aktynoniny była znacznie wolniejsza niż dla CCCP, co bezpośrednio zaburza łańcuch transportu elektronów; jest to zgodne z oczekiwanym pośrednim wpływem aktynoniny na ten szlak. Ponadto, gdy komórki traktowano aktynoniną przez 24 godziny, a następnie usunięto z leczenia, potencjał błony mitochondrialnej odzyskał komórki. normalny potencjał spoczynkowy po około 8 godzinach (dane nie pokazane). Ta zależna od aktynoniny depolaryzacja i późniejsze wyleczenie za pomocą wymywania actinonin obserwowano również w przypadku linii komórkowych HeLa (gruczolakorak szyjny) i HL60 (białaczka mieloidalna). W przeciwieństwie do tego, normalne limfocyty krwi obwodowej inkubowane z aktynoniną w tych samych 3 dawkach nie wykazywały depolaryzacji w czasie (Figura 6). Figura 6Aktinonina wybiórczo powoduje depolaryzację błony mitochondrialnej w sposób zależny od czasu i dawki. Komórki chłoniaka RL (dolne 3 krzywe) inkubowano z aktynoniną w stężeniu 10 .g / ml (wypełnione kółka), 20 .g / ml (wypełnione trójkąty) lub 100 .g / ml (wypełnione kwadraty), potraktowano barwnikiem JC-1 i analizowane za pomocą cytometrii przepływowej. Leczenie aktynoniną prowadziło do zależnej od czasu i dawki depolaryzacji błony mitochondrialnej, o czym świadczy znaczny spadek (* P <0,05) w stosunku fluorescencji czerwony / zielony. CCCP (wypełniony diament) zastosowano jako kontrolę pozytywną i wykazał depolaryzację po 10 minutach leczenia. Normalne limfocyty krwi obwodowej (górne 3 krzywe) inkubowano z aktynoniną w stężeniu 10 .g / ml (puste kółka), 20 .g / ml (otwarte trójkąty) lub 100 .g / ml (puste kwadraty), traktowane JC-1 barwnik i analizowano za pomocą cytometrii przepływowej. Nie było zależnej od czasu lub dawki depolaryzacji błony mitochondrialnej z leczeniem aktynoniną, chociaż kontrola CCCP (otwarty diament) była skuteczna po 10 minutach. Wszystkie wartości wykreślone (średnia . SD) reprezentują znormalizowany stosunek fluorescencji (czerwony / zielony) obliczony jako podział stosunku dla każdego punktu czasowego przez stosunek w czasie 0 (komórki RL w t0, 1,853. 0,079, normalne komórki w t0, 0,349 0,106). Następnie wysunęliśmy hipotezę, że wyczerpanie ATP może być możliwą konsekwencją wywołanej actinoninem dysfunkcji mitochondriów. Aby dokładniej zbadać to zagadnienie, zmierzyliśmy poziomy ATP w komórkach Daudi potraktowanych różnymi dawkami aktynoniny (5, 10 i 20 .g / ml) i odkryliśmy, że obniżyły one poziomy ATP w sposób zależny od czasu i dawki. Przy najwyższej dawce wynoszącej 20 .g / ml, zubożona w aktynomoninę zawartość ATP o 56,0% po 12 godzinach, 67,3% po 24 godzinach i 95,8% po 36 godzinach. Przeprowadziliśmy także kilka wstępnych eksperymentów, aby zbadać apoptozę wywołaną aktynoniną. Poprzednio opublikowaliśmy raport (20), że aktynonina wywołuje niski poziom apoptozy (około 10%) w komórkach nie wyrażających APN, na podstawie testu TUNEL. Potwierdziliśmy ten niski poziom apoptozy stosując wybarwianie aneksyną V i znaleźliśmy nie więcej niż 7% aneksyny V. Pozytywnych, jodocyp propidyny z ujemnymi komórkami Daudiego w odpowiedzi na tę samą dawkę aktynoniny. Actinonin hamuje wzrost ksenoprzeszczepu ludzkiego guza u myszy. Chociaż poprzednie prace pokazały, że aktynonina była skuteczna w syngenicznym modelu białaczki AKR, szeroka aktywność przeciwnowotworowa obserwowana tutaj in vitro skłoniła do zbadania, czy aktynonina byłaby skuteczna przeciwko mysim modelom heteroprzeszczepu ludzkich guzów litych. Actinonin został bezpiecznie podawany myszom jako antybiotyk w dawkach do 400 mg / kg (19). W związku z tym wydaje się, że nie wykazuje znaczącej toksyczności w stosunku do prawidłowych tkanek, pomimo aktywności przeciwnowotworowej in vitro. Co godne uwagi, aktynonina wykazywała znaczącą aktywność przeciwnowotworową po podaniu ip lub doustnie w modelu heteroprzeszczepu ludzkiego raka prostaty CWR22 u myszy nagich (Figura 7A). Podczas leczenia zwierzęta nie wykazywały oznak toksyczności klinicznej. Schemat 250 mg / kg ip i dawka doustna 500 mg / kg były równie skuteczne w hamowaniu wzrostu nowotworu; to sugeruje, że aktynomina jest biodostępna doustnie. Podobną aktywność przeciwnowotworową obserwowano w 2 innych modelach przeszczepów ludzkich guza u nagich myszy z niedrobnokomórkowym rakiem płuc A549 (Figura 7B) i ludzkim rakiem prostaty PC3 (dane nie przedstawione). Dlatego wydaje się, że aktynonina wykazuje znaczącą aktywność in vivo w stosunku do ludzkich nowotworów o tolerowanej toksyczności. Figura 7Aktinonina hamuje wzrost ludzkiego guza w modelach myszy heteroprzeszczepowych. (A) Gruboskrzydłe myszy nagie z ksenoprzeszczepami ludzkiego raka prostaty CWR22 traktowano kontrolną nośnikiem (puste kółka), aktynominą w dawce 250 mg / kg ip [przypisy: bytovia hpu pl, szczepienie dur brzuszny, błonnik witalny opinie lekarzy ] [więcej w: poradnia rodzinna zdrowie, chusteczki antybakteryjne, błonnik witalny opinie lekarzy ] [więcej w: poradnia rodzinna zdrowie, chusteczki antybakteryjne, błonnik witalny opinie lekarzy ]