Wprowadzenie wirusa paragrypy do komórek jako cel przerywania choroby układu oddechowego u dzieci ad 5

Białka HN o zwiększonym powinowactwie do receptora lub o zmniejszonej aktywności enzymatycznej (rozszczepianie receptorów) pozostają w stanie związanym z ich receptorem dłużej niż białka HN WT. Zarówno aktywność wiązania z receptorem na powierzchni komórki, jak i aktywność neuraminidazy białka HN, poprzez wpływ na czas trwania oddziaływania receptora HN, regulują aktywację białka F i promocję fuzji. Intrygujący zmutowany wirus to taki, który zawiera zmianę (P111S) w regionie trzonu cząsteczki HN wraz z globularną mutacją głowy, która zmniejsza aktywność neuraminidazy. Podczas gdy wirusy z tą cząsteczką HN są rzeczywiście pozbawione neuraminidazy, są wadliwe w promowaniu fuzji komórek, w przeciwieństwie do tego, co można przewidzieć (30). Było to pierwsze wskazanie, że istnieje oddzielna funkcja białka HN, która specyficznie wyzwala białko F i że znajduje się w regionie łodygi białka. Test do pomiaru funkcji wyzwalającej białko F białka HN (30) wykorzystuje związek zawierający receptor sialowy a zawierający receptor inhibitora analogu / neuraminidazy, 4-guanidyno-Neu5Ac2en (4-GU-DANA, zanamivir, Relenza), który służy jako klinicznie skuteczny środek przeciw grypie (44). Podczas gdy 4-GU-DANA hamuje aktywność neuraminidazy HPIV, nie zapobiega ona uwalnianiu wirusa z zainfekowanej powierzchni komórki (45), tak jak ma to miejsce w przypadku wirusów grypy; zamiast tego blokuje interakcję pomiędzy białkiem HN paragrypy a jej receptorem, a tym samym. zaskakująco. pomaga w uwolnieniu nowo zmontowanych wirionów z zainfekowanej komórki (18). Jednakże, interferując z interakcją z receptorem HN, 4-GU-DANA blokuje wiązanie receptora i tym samym blokuje fuzję i wejście wirusa (18, 45). Wyniki te wzbudziły zainteresowanie opracowaniem inhibitorów wiązania / wejścia do leczenia infekcji paramyksowirusem. Gdy porównano WT i wariant białka HN pod kątem ich zdolności do wyzwalania białka WT F, pojawiło się kilka wniosków. Białko HN pochodzące z wirusa defektywnego pod względem neuraminidazy / defektu fuzyjnego ma 2 zmiany aminokwasowe (D216N w głowie kulistej i P111S w łodydze) i jest wolniejsze w aktywowaniu białka F niż białko WN HN lub pojedynczo. zmutowane białko HN D216N. Porównanie z pojedynczo zmutowanym białkiem HN P111S ujawniło, że to opóźnienie wyzwalające można w całości przypisać mutacji P111S (30). Wyzwalanie białka F było dramatycznie zmniejszone przez tę zmianę regionu łodygi cząsteczki, chociaż nie było spadku awidności wiązania receptora. Przeprowadzenie eksperymentów w temperaturze i pH nie dopuszczających aktywności neuraminidazy wyeliminowało wpływ aktywności neuraminidazy białka HN. W wyniku zmniejszonego wyzwalania znacznie zmniejszyła się również fuzja komórek. Wirus zawierający podwójnie zmutowane białko HN D216N / P111S jest jedynym wirusem z wariantem paramyksowirusa, który okazał się szczególnie wadliwy w aktywacji białka i białka fuzyjnego F białka HN i był to pierwszy przypadek, kiedy wada fuzji mogła być specyficznie uszkodzona. przypisywane funkcji wyzwalania białka HN, niezależnie od wpływu innych funkcji 2 białka HN (30). Fakt, że zmiana w białku HN doprowadziła do specyficznego defektu w promowaniu fuzji, pokazał, że faktycznie jest to białko HN, które aktywuje białko F. Właściwości białka HN, które modulują jego zdolność do wyzwalania białka F Gdy znane białka wariantu HN są badane w warunkach doświadczalnych, które pozwalają na ocenę wszystkich funkcji 3 białka HN, staje się jasne, że równowaga między tymi właściwościami determinuje wejście (29). Wyzwalanie białka F przez białko HN WT dramatycznie zmniejsza się przy pH zbliżonym do optimum dla neuraminidazy (pH 5,7); receptory komórek docelowych są uwalniane z białka HN przez neuraminidazę i występuje niewielkie wyzwalanie. Jednak w przypadku martwego neuraminidazy białka HN (D216N / P111S HN) szybkość i zakres wyzwalania białkiem F są takie same zarówno przy pH 5,7, jak i pH 8,0 (pH, przy którym neuraminidaza nie jest aktywna), co potwierdza, że dla białko HN WT, to wzmocniona aktywność neuraminidazy przy niskim pH, która zmniejsza wyzwalanie białka F. Porównanie podwójnie zmutowanego białka z H11 P111S (30) ujawniło wpływ aktywności neuraminidazy na białko HN: H11 P111S (z resztkową aktywnością neuraminidazy) uwalnia odwracalnie związane receptory z białka HN, w przeciwieństwie do HN D216N / P111S , jego wyzwalanie nie może nadążyć. pozostając w dłuższym kontakcie z receptorem. Wartość pH sprzyjająca zwiększonej aktywności neuraminidazy (pH 5,7) całkowicie znosi wyzwalanie przez HN P111S. To porównanie różnych białek HN. z aktywnością neuraminidazy jako jedyną zmienną. ilustruje kluczową rolę tego enzymu w regulacji wyzwalania białkiem F: neuraminidaza zmniejsza szansę, że białko HN pozostanie w kontakcie z receptorami komórek docelowych i w ten sposób zapobiegnie wykonywaniu powoli wyzwalającego białka HN. Aby ocenić wpływ awidności receptora na wyzwalanie, wariant HN (T193A) z wyższą awidit
[patrz też: bytovia hpu, kamil juraszek, porozumienie rodzicielskie wzór ]
[więcej w: rezonans magnetyczny otwarty warszawa, zielone koktajle przepisy, jak przygotować bakłażana ]
[więcej w: rezonans magnetyczny otwarty warszawa, zielone koktajle przepisy, jak przygotować bakłażana ]