Substrat receptora insulinowego 2 odgrywa kluczową rolę w komórki i podwzgórze cd

Wyjściowe spożycie pokarmu mierzono podczas iniekcji PBS. Wartości to środki. SE danych uzyskanych z analizy kontrolnej (czarny słupek, n = 9) i myszy. HT-IRS2 (biały słupek, n = 7). (E) Hybrydyzacja in situ receptora leptyny i Irs2 w podwzgórzach myszy kontrolnych i myszy. HT-IRS2. Pasek skali to mm. (F) Fosforylacja stymulowana insuliną Akt (u góry) i stymulowana leptyną fosforylacja Stat3 (u dołu). Górne panele: lizaty od nieleczonych i leczonych insuliną myszy poddawano immunoblottingowi dla anty-fosfo-Akt (pAkt) i anty-Akt. Niższe panele: lizaty nietraktowanych i traktowanych leptyną myszy poddawano immunoblottingowi dla anty-fosfo-Stat3 (pStat3) i anty-Stat3. Na wykresach białe paski przedstawiają fosforylację stymulowaną insuliną (po lewej) lub leptyną (po prawej). Dane (oznaczane. SE) są reprezentatywne dla co najmniej 3 niezależnych eksperymentów. * P <0,05; ** P <0,01. Aby dodatkowo potwierdzić, że Irs2 została usunięta w podwzgórzu, szczególnie w obszarach pozytywnych receptora leptyny, przeprowadziliśmy hybrydyzację in situ na skrawkach mózgu, które obejmowały podwzgórze. Stwierdziliśmy, że ekspresja Irs2 była znacznie zmniejszona w obszarach pozytywnych receptora leptyny w łukowatym jądrze podwzgórza (Figura 2E). Analizy ilościowe wykazały, że poziomy ekspresji Irs2 w podwzgórzach myszy. HT-IRS2 były znacząco zmniejszone w porównaniu z myszami kontrolnymi (1,61. 0,01 kBq / g w kontroli vs. 0,86. 0,05 kBq / g w. HT-IRS2, P < 0,001). Aby ocenić insulinę i sygnalizację leptyny w podwzgórzach myszy. HT-IRS2, przeprowadziliśmy analizy Western blot. Stymulowana insuliną fosforylacja Akt u tych myszy została zredukowana do 49% poziomu obserwowanego u myszy kontrolnych (Figura 2F, lewy panel). Stymulowana leptyną fosforylacja przekaźnika sygnału i aktywatora transkrypcji 3 (Stat3) u tych myszy była również zmniejszona o 42% w porównaniu do tej u myszy kontrolnych (Figura 2F, prawy panel), co sugeruje, że zarówno insulina jak i sygnalizacja leptyny były osłabione w . podwzgórze HT-IRS2. Myszy HT-IRS2 wykazują oporność na insulinę, nietolerancję glukozy i dyslipidemię. W przeciwieństwie do Irs2. /. myszy (11, 13), myszy. HT-IRS2 nie wykazywały poziomu glukozy na czczo i insuliny w 8 tygodniu (Figura 3A). Losowe oznaczenia stężenia glukozy we krwi dawały podobne poziomy u myszy. HT-IRS2 i myszy kontrolnych po 8 tygodniach i 12 tygodniach (Figura 3B). Badanie wrażliwości na insulinę za pomocą testów tolerancji insuliny nie wykazało znaczącej różnicy między (3 HT-IRS2 i myszami kontrolnymi po 4 tygodniach (Figura 3C, górny lewy panel). Jednak po 8 i 12 tygodniach działanie insuliny na obniżenie stężenia glukozy było istotnie mniejsze u myszy. HT-IRS2, co sugeruje, że wzrost masy ciała u tych myszy po 8 i 12 tygodniach jest związany z opornością na insulinę (Figura 3C, w prawym górnym rogu). i dolne lewe panele). W rzeczywistości, gdy masy ciała myszy. HT-IRS2 i myszy kontrolnej stały się podobne podczas 4-tygodniowej restrykcji kalorycznej, działanie insuliny obniżające stężenie glukozy stało się nierozróżnialne pomiędzy dwiema grupami po 8 tygodniach (Figura 3C, dolny prawy panel). Następnie zbadaliśmy tolerancję glukozy u myszy. HT-IRS2 i myszy kontrolnych za pomocą doustnych testów tolerancji glukozy po 8 tygodniach, zarówno z ograniczeniem kalorycznym (Figura 2D, górne panele), jak i bez ograniczenia kalorycznego (Figura 2D, dolne panele). Po obciążeniu glukozą poziomy glukozy we krwi obu grup były znacząco wyższe u myszy. HT-IRS2 niż u myszy kontrolnych (Figura 3D, lewe panele). Poziomy insuliny w osoczu w obu grupach po obciążeniu glukozą były znacząco niższe u myszy. HT-IRS2 niż u myszy kontrolnych (Figura 3D, prawe panele). Te wyniki wskazują, że nietolerancja glukozy u myszy. HT-IRS2 jest przypisywana zaburzonemu wydzielaniu insuliny wywołanemu przez glukozę. Ocena metabolizmu lipidów wykazała znacząco wyższe poziomy całkowitego cholesterolu i triglicerydów w surowicy u myszy. HT-IRS2 niż u myszy kontrolnych (Figura 3E, panele lewy i środkowy), podczas gdy poziomy wolnych kwasów tłuszczowych w surowicy były podobne (Figura 3E, prawy panel). Figura 3: Myszy HT-IRS2 wykazywały oporność na insulinę, nietolerancję glukozy i dyslipidemię. (A) Glukoza na czczo (po lewej) i poziomy insuliny (po prawej) kontroli i myszy. HT-IRS2 po 8 tygodniach. Wartości to środki. SE danych uzyskanych z analizy kontrolnej (czarny słupek, n = 12) i myszy. HT-IRS2 (biały słupek, n = 13). (B) Losowe poziomy glukozy we krwi kontrolnej i myszy. HT-IRS2 w 8 i 12 tygodniu [przypisy: szpital powiatowy mikołów, leczenie zębów w narkozie, kamil juraszek ] [patrz też: błonnik witalny opinie lekarzy, narodowy fundusz zdrowia sanatorium, dlaczego ziewanie jest zaraźliwe ] [przypisy: błonnik witalny opinie lekarzy, narodowy fundusz zdrowia sanatorium, dlaczego ziewanie jest zaraźliwe ]