Substrat receptora insulinowego 2 odgrywa kluczową rolę w komórki i podwzgórze ad

Następnie badaliśmy poziomy ekspresji mRNA Cre i mRNA Irs2 w wątrobach, mięśniach szkieletowych, tkankach tłuszczowych, podwzgórzach i wysepkach trzustkowych myszy WT, RIP-Cre, Irs2lox / lox i Irs2lox / lox / RIP-Cre. Wykryto RT-PCR Czy ekspresja mRNA w trzustce. komórki myszy RIP-Cre i Irs2lox / lox / RIP-Cre, ale nie w wątrobie, mięśniach szkieletowych lub tkance tłuszczowej (Figura 1D). Chociaż rekombinaza Cre znajdowała się pod kontrolą promotora szczurzej insuliny II, mRNA Cre wykryto również w podwzgórzach myszy Irs2lox / lox / RIP-Cre i RIP-Cre (Figura 1D), co sugeruje, że delecja Irs2 wystąpiła również w podwzgórze. Faktycznie, chociaż nie wykryto różnic poziomów mRNA Irs2 pomiędzy genotypami w wątrobie, mięśniach szkieletowych lub tkankach tłuszczowych (Figura 1D), poziomy mRNA Irs2 w wysepkach były znacząco zmniejszone u myszy Irs2lox / lox / RIP-Cre (Figura 1D), a poziomy mRNA dla Irs2 w podwzgórzu były częściowo (50%) zmniejszone u myszy Irs2lox / lox / RIP-Cre (Figura 1D). Odkrycia te wskazują, że myszami Irs2lox / lox / RIP-Cre były myszy. HT-IRS2. Figura Generacja myszy. HT-IRS2. (A) Schematyczne przedstawienie 3 etapów w naszej strategii targetowania genów. (B) Analiza Southern blot. Po lewej: genomowy DNA strawiony SacI genotypu komórkowego hybrydyzuje z sondą A. Pasmo 4 kb odpowiada allelowi WT (+), a pasmo 3,2 kb do pierwszego etapu zmutowanego allelu (neo). Środek: genomowe DNA strawione enzymem ESI i EcoRV hybrydyzuje z sondą B. Pasmo 11,8 kb odpowiada allelowi WT (+), pasowi 2,9 kb do allelu (neo) i pasmu 1,6 kb do drugi etap zmutowanego (.) allelu. Z prawej: DNA genomowego DNA strawionego HindIII hybrydyzuje z sondą C. Pasmo 17,3 kb odpowiada allelowi WT (+), pasowi 15,2 kb do zmutowanego (a) allelu i pasmu 6 kb do końcowego etapu zmutowanego (neo .) allelu. (C) Analiza PCR genomowego DNA w celu wykrycia rekombinacji za pośrednictwem Cre. K, nerka; L, wątroba; M, mięśnie; A, tkanka tłuszczowa; S, śledziona; HT, podwzgórze; H, serce; Lu, płuco; Ja, wysepka. (D) RT-PCR ekspresji Cre i Irs2 w wątrobie, mięśniach szkieletowych, tkance tłuszczowej, podwzgórzu i wysepkach trzustkowych WT, RIP-Cre, IRS2lox / lox i IRS2lox / lox / RIP-Cre (. HT-IRS2) myszy. (E) Analiza Western blot z Irs2 w wysepkach trzustkowych (górny panel) i podwzgórze (dolny panel) myszy kontrolnych i myszy. HT-IRS2. Biorąc pod uwagę podobne poziomy ekspresji Irs2 w. komórki i podwzgórze u myszy WT, RIP-Cre i Irs2lox / lox, co wskazuje, że ani insercja miejsc loxP i neomycyny (neoR), ani ekspresja samej rekombinazy Cre nie wpływała na obfitość Irs2, przeprowadziliśmy kolejne eksperymenty przy użyciu myszy Irs2lox / lox (kontrola) i myszy. HT-IRS2. Białko Irs2 nie było wykrywane w wysepkach i było częściowo (50%) zmniejszone w podwzgórzach myszy. HT-IRS2 (Figura 1E). Myszy HT-IRS2 wykazują oporność na leptynę. Masa ciała myszy. HT-IRS2 była znacznie wyższa niż myszy kontrolnych od 5 tygodni (fig. 2A). Biała masa tkanki tłuszczowej (WAT) najądrzowych poduszeczek tłuszczowych była również znacząco wyższa u myszy. HT-IRS2 niż u myszy kontrolnych po 12 tygodniach (Figura 2B). Po 8 tygodniach stężenia leptyny w surowicy na czczo były znacząco wyższe u myszy. HT-IRS2 niż u myszy kontrolnych (Figura 2C), co sugeruje, że ten pierwszy jest oporny na leptynę. Aby bezpośrednio ocenić wrażliwość na leptynę, porównaliśmy odpowiedzi myszy. HT-IRS2 i myszy kontrolnych z egzogenną leptyną. Tłumienie przyjmowania pokarmu było znacznie mniejsze u myszy. HT-IRS2 niż u myszy kontrolnych, a masa ciała była znacząco zmniejszona u myszy kontrolnych, ale nie u myszy. HT-IRS2 (Figura 2D, górne panele). Aby wykluczyć możliwość, że ta oporność na leptynę może być wtórna do otyłości, następnie oceniliśmy wrażliwość na leptynę u 8-tygodniowych myszy. HT-IRS2, które były karmione parą z myszami kontrolnymi przez 4 tygodnie, poczynając od 4 tygodnia życia. Myszy HT-IRS2 karmione parą nie stały się otyłe; ich masy ciała były identyczne jak w przypadku kontroli. Tłumienie przyjmowania pokarmu było znacząco zmniejszone u myszy. HT-IRS2 w porównaniu z myszami kontrolnymi, a masa ciała była znacząco zmniejszona u myszy kontrolnych, ale nie u myszy. HT-IRS2 (Figura 2D, dolne panele). Figura 2: Myszy HT-IRS2 wykazywały oporność na leptynę. (A) Masy ciała kontroli i myszy. HT-IRS2. Wartości to środki. SE danych uzyskanych z analizy kontrolnej (wypełnione kwadraty, n = 10) i myszy. HT-IRS2 (puste kółka, n = 11). (B) Masa WAT najądrzowych poduszek tłuszczowych kontrolnych i myszy. HT-IRS2 po 12 tygodniach. Wartości to środki. SE danych uzyskanych z analizy kontrolnej (czarna kostka, n = 5) i myszy. HT-IRS2 (biała kreska, n = 9)
[podobne: błonnik witalny opinie lekarzy, dlaczego ziewanie jest zaraźliwe, poradnia rodzinna zdrowie ]
[patrz też: porozumienie rodzicielskie wzór, poradnia rodzinna zdrowie, chusteczki antybakteryjne ]
[hasła pokrewne: porozumienie rodzicielskie wzór, poradnia rodzinna zdrowie, chusteczki antybakteryjne ]