Rola limfotoksyny powierzchniowej w eksperymentalnym autoimmunologicznym zapaleniu mózgu i rdzenia niezależna od LIGHT cd

Każdy szczur otrzymał pojedyncze podskórne wstrzyknięcie 100 ml emulsji zawierającej łącznie 25 g peptydu i 400 g prątka dla każdego zwierzęcia. Chorobę monitorowano codziennie przez pomiar porażenia według następującego systemu ocen: 0 = brak choroby; 0,5 = połowa ogona wiotki; 1,0 = cały ogon wiotcze; 2,0 = osłabienie kończyn tylnych; 3,0 = porażenie kończyn tylnych; 4.0 = kończyna tylna plus jedno porażenie przedniej kończyny; 5.0 = konający lub martwy, z częstością występowania choroby zawsze na poziomie 100%. W każdym eksperymencie zastosowano test Dunna dla porównania wielu grup z grupą huIgG, a bezpośrednie porównania między dwiema grupami przeprowadzono za pomocą testu sumy rang Manna-Whitneya. Indukcja nawracającego EAE (R-EAE) u myszy SJL. Myszy SJL traktowano wstępnie w dniu 11, a następnie raz na tydzień wstrzyknięciami iv 100 .g LT (3-Ig (mysiego IgG-1 Fc) lub mysiego IgG-1 kontrolnego MOPC21 (32 myszy na grupę). Zastosowano mysi konstrukt IgG-1, ponieważ poziomy we krwi ludzkiej wersji IgG-1 nie mogły być utrzymane dłużej niż 1-2 tygodni (mierzone za pomocą testu ELISA w surowicy, dane nieukazane). Wstrzyknięcia przeprowadzono iv w celu dalszej redukcji dowolnej potencjalnej antygenowości konstruktu LT. R-Ig. Myszy immunizowano następnego dnia (dzień 0) za pomocą trzech wstrzyknięć podskórnych z tyłu, w sumie 100. L emulsyfikacji bydlęcego peptydu białka proteolipidowego (PLP139. 151) (HSLGTKWLGHPDKF, zsyntetyzowanego w Biogen Inc.) w CFA. Końcowe stężenia peptydu i M. tuberculosis wynosiły odpowiednio 100 .g / mysz i 200 .g / mysz. Chorobę monitorowano codziennie w sposób zaślepiony, mierząc porażenie według następującego tradycyjnego systemu ocen: 0 = brak choroby; = osłabienie ogona lub lekkie osłabienie kończyn tylnych; 2 = osłabienie kończyn tylnych; 3 = częściowe porażenie kończyn tylnych; 4 = całkowite porażenie kończyn tylnych; 5 = całkowite porażenie kończyn tylnych plus paraliż kończyn przednich; 6 = konający lub martwy. Częstość występowania choroby wynosiła około 75% w każdej grupie, a następnie monitorowano tylko te zwierzęta. Średnia ocena choroby została określona dla każdej grupy. Nawrót został zdefiniowany jako 2 kolejne dni wzrostu wyniku o co najmniej 1,5 w stosunku do wyniku przed zwalnianiem, a częstość nawrotu wskazywała na nagromadzenie nawrotów w kohorcie w czasie. Średnie maksymalne wyniki choroby porównano między grupami, stosując jednoczynnikową ANOVA. Częstotliwość nawrotów między grupami została porównana przy użyciu testu z. Indukowanie EAE u myszy C57BL / 6. Myszy C57BL / 6 w wieku ośmiu do dwunastu tygodni traktowano wstępnie w dniu 1, a następnie raz w tygodniu wstrzyknięciami dootrzewnowymi 5 mg / kg albo LT-R-Ig (ludzka IgG-1 Fc) albo poliklonalną kontrolą ludzkiej IgG. Myszy (n = 30 na grupę) immunizowano następnego dnia (dzień 0) za pomocą dwóch wstrzyknięć podskórnych z tyłu, w sumie 200 .l emulsji peptydu MOG35 (55 (MEVGWYRSPFSRVVHLYRNGK, Bachem AG, Bubendorf, Szwajcaria) w CFA. Końcowe stężenia peptydu i M. tuberculosis wynosiły odpowiednio 150 .g / mysz i .g / mysz. PTx (400 ng; LIST Biological Laboratories Inc., Campbell, Kalifornia, USA) wstrzyknięto dootrzewnowo w dniach 0 i 2. Eksperyment powtórzono stosując 500 .g / mysz M. tuberculosis i 200 ng PTx z podobnymi wynikami (dane nie pokazane). Chorobę monitorowano codziennie, mierząc porażenie w skali 0. 6, jak opisano powyżej. Średnie maksymalne wyniki choroby porównano między grupami, stosując jednoczynnikową ANOVA. DO11.10 Adaptacyjne eksperymenty transferu komórek. W celu oceny swoistej wobec antygenu (specyficznej wobec Ag) ekspansji limfocytów T in vivo, myszy DO11.10 zastosowano jako źródło swoistych dla specyficznych dla peptydu OVA specyficznych względem OVA323 (339a) komórek T dawcy (25). Komórki T CD4 + oczyszczono przez selekcję negatywną przy użyciu kolumn do odzyskiwania komórek CD4 specyficznych dla myszy, zgodnie ze specyfikacjami producenta (Cedarlane Laboratories Ltd., Hornby, Ontario, Kanada). Czystość komórek T CD4 + oceniano za pomocą cytometrii przepływowej przy użyciu CD4-Cyc i CD62L-PE (oba z PharMingen) w połączeniu z biotyną KJ126 (Caltag Laboratories Inc., Burlingame, Kalifornia, USA) i streptawidyną-FITC (PharMingen) w celu zidentyfikowania Komórki T DO11.10. Naiwne komórki KJ126 + CD4 + (3 x 106) zostały adopcyjnie przeniesione dożylnie do nienasyconych, syngenicznych, BALB / c biorców typu dzikiego, którzy byli wcześniej traktowani przez 7 dni kontrolą huIgG lub LTpR-Ig. W niektórych doświadczeniach przeniesione komórki T wstępnie znakowano 1. M CFSE przez 10 minut w 37 ° C. Pewnego dnia po przeniesieniu komórek myszy nie były leczone (grupa kontrolna) lub immunizowane podskórnie 50 .g OVA323 a 339 zemulgowanych w CFA (Difco Laboratories). Terapie LT-R-Ig i huIgG kontynuowano w 7-dniowych odstępach po immunizacji
[hasła pokrewne: szczepienie dur brzuszny, barszcz czerwony magdy gessler, jak przygotować bakłażana ]
[więcej w: błonnik witalny opinie lekarzy, narodowy fundusz zdrowia sanatorium, dlaczego ziewanie jest zaraźliwe ]
[patrz też: błonnik witalny opinie lekarzy, narodowy fundusz zdrowia sanatorium, dlaczego ziewanie jest zaraźliwe ]