Rola limfotoksyny powierzchniowej w eksperymentalnym autoimmunologicznym zapaleniu mózgu i rdzenia niezależna od LIGHT ad

Zarówno mAb blokujące anty-LTb, jak i inhibitor specyficzny dla LIGHT, HVEM-Ig, zastosowano do oceny roli LIGHT i LT. Wyniki wskazują, że LT (3-Ig) zmniejszyło chorobę w modelach, które nie są zależne od PTx, ujawniając w ten sposób wcześniej niedocenianą rolę szlaku LT w EAE. Co więcej, LT. /. heterotrimer jest zaangażowany w patogenezę EAE niezależną od liganda LIGHT. Na koniec, stwierdzono, że odpowiedzi przypominające o komórkach T, ale nie pobudzanie komórek T, były upośledzone, gdy szlak LT został zahamowany, dostarczając potencjalnego wyjaśnienia roli szlaku LT w chorobach autoimmunologicznych za pośrednictwem limfocytów T. Metody Zwierzęta. Samice szczurów Lewisa, w wieku 6. 8 tygodni, otrzymano od Harlan Sprague Dawley (Indianapolis, Indiana, USA). Samice 6- do 8-tygodniowych myszy SJL, C57BL / 6, BALB / c i BALB / c DO11.10 otrzymano z The Jackson Laboratory (Bar Harbor, Maine, USA). Wszystkie zwierzęta były trzymane w określonych warunkach dla barier wolnych od patogenu w Biogen Inc. Wszystkie protokoły zostały zatwierdzone przez Komitet ds. Pielęgnacji i Używania Zwierząt Biogen Inc. Sparaliżowane myszy i szczury uzyskały łatwy dostęp do pokarmu i wody i podskórne wstrzyknięcia 2,5% roztworu dekstrozy w ilości 100 ml / kg w razie potrzeby. Odczynniki. W tych badaniach wykorzystano trzy formy mysich LT (R sprzężonych z różnymi domenami Fc Ig. Białko fuzyjne typu mysiego receptora-ludzkiej IgG-1 opisano wcześniej i przygotowano również drugą podobną postać, która zawierała mutację N297Q w domenie Fc (21). Ten ostatni konstrukt nie ma miejsca glikozylacji związanego z Fc N, a zatem utracił zdolność wiązania FcyRIII (22). Trzeci konstrukt skondensował mysi receptor z mysią domeną Fc IgG-1. Wszystkie białka fuzyjne wytworzono z komórek CHO, oczyszczono za pomocą konwencjonalnej chromatografii powinowactwa na bazie białka A (3 i zawierały mniej niż 0,5 jednostek endotoksyny na miligram białka. Mysie HVEM sklonowano za pomocą RT-PCR i wyrażono jako białko fuzyjne z ludzką domeną Fc IgG-1 zawierającą mutację N297Q. Ponieważ konstrukt ten wiąże zarówno ludzki, jak i mysi LEKK wyrażony na powierzchni komórki w podobny sposób w eksperymentach wiązania FACS (dane niepokazane), założono z grubsza równoważne wiązanie ze szczurzym LIGHT. Ponadto, zarówno mysi HVEM-Ig jak i ludzki HVEM-Ig zapobiegają in vitro zabójstwu komórek HT29 za pośrednictwem ludzkiego LIGHT z podobnym ED50 (dane nie pokazane, 5 ug / ml). Blokujący ormiański chomik anty-mysi LT. Opisano i pokazano, że mAb (BBF6) funkcjonuje in vivo u myszy (23, 24). Chomikowa hybrydoma anty-KLH z chomika ormiańskiego (HA4 / 8) była prezentem od Donny Mendrick (Harvard Medical School, Brigham and Women. S Hospital, Boston, Massachusetts, USA). Zdolność anty-LT. a LT-R-Ig do wiązania ze szczurzym LT oceniano za pomocą aktywowanych PMA śledzionowych komórek T, i w tych analizach FACS wiązania z komórkami myszy i szczurów, stężenia ED50 wynosiły 25 i 14 ng / ml z LT (3-Ig i 0,82 i 1,0 ng / ml z anty-LT .. Pokrótce, splenocyty aktywowano za pomocą 50 ng / ml PMA przez noc, przemyto, a następnie wybarwiono AB2 B220-FITC i CD4-CyC (oba z PharMingen, San Diego, Kalifornia, USA) zasadniczo jak opisano (21). Komórki zabarwiono również anty-LT. w porównaniu do kontroli HA4 / 8, a następnie skoniugowanego z PE anty-chomiczego Ab (Jackson Immunochemicals, West Grove, Pennsylvania, USA) lub alternatywnie LT (3-Ig w porównaniu z kontrolą ludzkiej gamma globuliny (huIgG), a następnie skoniugowanego z PE anty-ludzki Ab. S (Jackson Immunochemicals). Indukowanie EAE u szczurów Lewisa. Szczury poddano wstępnej obróbce w dniu poprzedzającym immunizację (dzień a 1), a następnie raz na tydzień wstrzyknięciami dootrzewnowymi LT (3-Ig (ludzki IgG-1 Fc), HVEM-Ig (ludzki IgG-1 Fc) lub poliklonalnym huIgG (panglobulinem). ZLB AG Bioplasma, Bern, Szwajcaria), który był stosowany w tym samym stężeniu, co LT (3-Ig i HVEM-Ig do kontrolowania wszelkich potencjalnych skutków niespecyficznych Abs w tym modelu. Dawkowanie wynosiło 5 mg / kg, o ile nie podano inaczej. Do leczenia anty-LT. mAb lub dopasowane do chomika mAb kontrolne izotypowe (HA4 / 8), szczury traktowano 5 mg / kg anty-LT. lub HA4 / 8 w dniu P2, dzień 0 (dzień immunizacji), a następnie kolejno w dniach 3, 5 i 7. Szczurom immunizowano (dzień 0) przez wstrzyknięcie na jednej tylnej łzie z emulsją świnki morskiej MBP68-86. peptyd (YGSLPQKSQ-RSDENPV, zsyntetyzowany w Biogen Inc.) w CFA. W skrócie, CFA przygotowano przez połączenie niekompletnego adiuwanta Freunda (Life Technologies Inc., Grand Island, Nowy Jork, USA) z drobno zmielonym Mycobacterium tuberculosis H37Ra (Difco Laboratories, Detroit, Michigan, USA). Peptyd MBP rozcieńczono do 0,5 mg / ml w PBS, rozcieńczono dwukrotnie taką samą objętością CFA, a następnie mieszaninę emulgowano tak, że końcowe stężenia peptydu i M
[więcej w: ubezpieczenia zdrowotne prywatne, barszcz czerwony magdy gessler, rezonans magnetyczny otwarty warszawa ]
[więcej w: porozumienie rodzicielskie wzór, poradnia rodzinna zdrowie, chusteczki antybakteryjne ]
[podobne: porozumienie rodzicielskie wzór, poradnia rodzinna zdrowie, chusteczki antybakteryjne ]