Rola limfotoksyny powierzchniowej w eksperymentalnym autoimmunologicznym zapaleniu mózgu i rdzenia niezależna od LIGHT ad 6

Dlatego sygnalizacja LT ma kluczowe znaczenie dla patogenezy OUN w tym modelu EAE, a LIGHT nie może zrekompensować braku sygnalizacji pośredniczonej przez LTp / P-. Traktowanie LT-R-Ig in vivo skutkuje zaburzeniami odpowiedzi limfocytów T ex vivo. Ponieważ szczurzy model EAE jest w przeważającej mierze kierowany komórkami T (27, 28), chcieliśmy ustalić, czy traktowanie LT. R-Ig in vivo powoduje defekty komórek T mierzone ex vivo. Odpowiednio, limfocyty T CD4 + z pachwinowych LN opróżniających miejsce immunizacji izolowano w dniu 10 przebiegu choroby. Gdy komórki T CD4 + ze szczurów traktowanych huIgG hodowano w obecności peptydu MBP i APC, obserwowano zależną od dawki odpowiedź proliferacyjną (Figura 2a, wypełnione romby). Komórki T CD4 + od szczurów leczonych LT (3-Igh wykazywały jednak znacznie mniejszą proliferację (P <0,03 przy 2,5 ug / ml peptydu MBP) w odpowiedzi na peptyd MBP (Figura 2a, otwarte kółka). Zgodnie z tymi wynikami, komórki T ze szczurów traktowanych LT-R-Igp wydzielają znacznie mniej IFN-y. w odpowiedzi na peptyd MBP niż komórki T ze szczurów traktowanych huIgG (P <0,03 przy 2,5 .g / ml peptydu MBP) (Figura 2b). Dlatego leczenie LT (3-Ig podczas EAE upośledza odpowiedź komórek T na peptyd MBP ex vivo, co może wyjaśniać obserwowaną skuteczność w modelu EAE szczura. Podobne wyniki uzyskano w 7 dniu po immunizacji (dane nie przedstawione). Figura 2CD4 + komórki T ze szczurów traktowanych LTYR-Igp reagują niedobrowolnie ex vivo. (a) Połączone komórki T CD4 + izolowano w D10 od szczurów w modelu EAE (n = 5), stymulowano in vitro napromieniowanymi splenocytami i wskazano stężenia peptydu MBP i proliferację mierzoną przez inkorporację 3H-tymidyny. Komórki pochodziły od szczurów traktowanych in vivo kontrolnymi huIgG (romby), LT (3-Ig (kółka) lub od naiwnych, nieleczonych szczurów jako kontroli (kwadraty). (b) Supernatanty z hodowli w peptydzie (0 i 2,5 ug / ml MBP, odpowiednio białe i szare paski) zebrano po 72 godzinach i zmierzono za pomocą ELISA dla IFN-y. zawartość. Doświadczenie powtórzono trzy razy z podobnymi wynikami, a także przeprowadzono w 7 dniu z podobnymi wynikami. Traktowanie LT-R-Ig zmienia lokalizację nacieków leukocytów w OUN. Immunizacja szczurów Lewisa peptydem MBP w CFA prowadzi do wytworzenia encefalitogennych komórek T, a następnie migracji komórek T do OUN, gdzie wytwarzają cytokiny i chemokiny, które pośredniczą w zapaleniu. Ponieważ leczenie LT (3-Ig skutecznie zapobiegało chorobie w modelu szczurzym EAE, chcieliśmy określić status OUN u tych szczurów. Zgodnie z tym, w 13 dniu przebiegu choroby szczura EAE, zebrano rdzeniowe rdzenie i nacieki analizowano stosując zarówno cytometrię przepływową, jak i podejścia histologiczne. U chorych szczurów limfocyty CD4 + i CD8 + łatwo wykrywa się w homogenizowanych rdzeniach kręgowych za pomocą cytometrii przepływowej (Figura 3a). Interesujące jest to, że gdy szczury traktowane huIgG i LTaR-Igp były bezpośrednio porównywane, nie zaobserwowano różnic w składzie nacieków z równoważnymi odsetkami komórek T CD4 + i CD8 + (Figura 3, b. C). Ponadto, liczba naciekających komórek T na wyizolowany rdzeń kręgowy dla grup kontrolnych względem grup traktujących LTR-Ig nie była znacząco różna (7,022. 1,743,9 vs. 174,6 dla limfocytów T CD8 +). Lokalizacja nacieków została również zbadana za pomocą analizy histologicznej tkanki rdzenia kręgowego (ryc. 3, dł). Nacieki w rdzeniach kręgowych od szczurów traktowanych huIgG pojawiają się w postaci rozproszonej zarówno przez szarą, jak i białą substancję (fig. 3, f oraz g). Przeciwnie, nacieki w rdzeniach kręgowych od szczurów traktowanych LT (3-Ig pojawiają się w dyskretnej konformacji okołonaczyniowej, a infiltracja leukocytów nie jest obserwowana w miąższu tkanki (Figura 3, h oraz i). Wyliczenie ciał apoptotycznych w tkance CNS ujawniło statystycznie istotną różnicę między huIgG w porównaniu z grupami traktującymi LT. R-Ig (14% w porównaniu z 3% zliczonych komórek; P <0,005), podczas gdy różnica między nieimmunizowanymi zwierzętami i LT. Grupa leczona R-Ig była statystycznie nieistotna (1% w porównaniu z 3% zliczonych komórek, P = 0,3). Dlatego hamowanie szlaku LT nie zmienia migracji komórek T do OUN; jednak lokalizacja leczenia nacieków i liczba ciał apoptotycznych w tkance są zależne od leczenia. Figura 3 Nacieki limfocytów wykrywa się w rdzeniach kręgowych dnia 13 szczurów EAE w obu grupach; jednakże zmienia się pozycjonowanie nacieków u szczurów traktowanych LTYR-Igp. Analiza FACS limfocytów uzyskanych z rdzeni kręgowych jest pokazana w [hasła pokrewne: bytovia hpu, leczenie zębów w narkozie, szczepienie dur brzuszny ] [podobne: bytovia hpu, bytovia hpu pl, kamil juraszek ] [patrz też: bytovia hpu, bytovia hpu pl, kamil juraszek ]