Rola limfotoksyny powierzchniowej w eksperymentalnym autoimmunologicznym zapaleniu mózgu i rdzenia niezależna od LIGHT ad 5

Średnią 562 komórek na próbkę z grup traktowanych i 125 komórek na próbkę z nietraktowanej grupy zliczono i obliczono stosunek ciałek apoptotycznych do całkowitej liczby komórek. Wyniki LT (3-Ig zapobiega rozwojowi choroby EAE w szczurzym modelu jednofazowym. EAE u szczurów Lewisa indukowano przez immunizację peptydem MBP w CFA, co skutkowało ostrą jednofazową chorobą, która osiąga szczyt w dniu 13 i ustąpiła do dnia 15. Stosując ten model EAE wolny od PTx, zwierzęta traktowano dzień przed immunizacją poliklonalne huIgG lub LTaR-Ig (ludzki IgG-1 Fc), szczury leczone LT (3-R-Ig wykazują bardzo małe porażenie (Figura 1a, otwarte kółka), a ich mediana skumulowanego wyniku klinicznego była znacząco niższa niż dla huIgG szczury (P <0,001). Co ważne, zahamowanie choroby można osiągnąć przy stosunkowo niskich stężeniach LTpR-Ig, z 50% zahamowaniem obserwowanym przy około 0,1 mg / kg (Figura 1b). W związku z tym LT (3-Ig jest silnym inhibitorem jednofazowego EAE, w przeważającej mierze układu z udziałem komórek T, w którym pośredniczą komórki T. Rycina Chorobę zapobiega się przez LTp-Ig lub anty-LT. leczenie w ostrym modelu szczurzym EAE. (a) Lewisowi szczurom podawano albo kontrolną ludzką IgG (romby), LT (3-Ig (kółka), albo N297Q LT (3-Ig (kwadraty) dzień przed immunizacją peptydem MBP w CFA, a chorobą było oceniane przez pomiar porażenia ogona i kończyn. (b) Odpowiedź na dawkę na LT (3-Ig oceniono w szczurzym modelu EAE podając LT (3-Ig w wskazanej dawce. Procent hamowania choroby obliczono przez określenie spadku wyniku klinicznego w dniu szczytu choroby. (c) Lewisowi szczurom podawano albo kontrolę huIgG (diamenty), HVEM-Ig (kwadraty), anty-mysie LT. (puste kółka) lub kontrolne mAb HA4 / 8 (wypełnione kółka) dzień przed immunizacją peptydem MBP w CFA. Leczenie anty-LT. i HA4 / 8 kontynuowano w dniach 3, 5 i 7 po immunizacji. Osiem zwierząt wykorzystano w każdej grupie, a eksperyment przeprowadzono trzy razy z podobnymi wynikami. Eksperymenty z użyciem przeciwciał anty-LT, HVEM-Ig i HA4 / 8 przeprowadzono dwukrotnie z podobnymi wynikami. Ponieważ środek wabikowy LT. R jest białkiem fuzyjnym Ig, ważne było ustalenie, czy mechanizm działania był po prostu spowodowany zmniejszeniem ilości komórek T w mózgu wywołanym przez komórki efektorowe za pomocą cytotoksyczności komórkowej zależnej od Ab (ADCC), ponieważ aktywowane limfocyty przejściowo wyrażają heterotrimer LT (13). W związku z tym przetestowaliśmy konstrukt LT. R-Ig zawierający mutację punktową N297Q, która usuwa miejsce glikozylacji krytyczne dla zaangażowania receptora FcR. III (22). Porównanie przebiegu choroby z konstruktem typu dzikiego w porównaniu z mutantem nie ujawniło znaczących różnic w skumulowanych medianych wynikach klinicznych (Figura 1a, otwarte kwadraty w porównaniu z otwartymi kółkami; P = 0,104), a krzywe dawka-odpowiedź były identyczne w najmniejszą dawkę testowanego aglikozylo-LT-R-Ig (0,3 mg / kg, dane nie pokazane). Stąd, ADCC nie jest wymagane w przypadku hamowania choroby za pośrednictwem LT. R-Ig ., w modelu szczurzym EAE. Skuteczność LT-R-Ig u szczura EAE zależy od LT. wiązanie do LT. R. Ostatnie badania na myszach z nadekspresją LIGHT sugerują, że ten członek rodziny TNF może być zaangażowany w autoimmunizację kierowaną przez limfocyty T (19, 20). Ponieważ LT (3-Ig będzie wiązać się z LIGHT i tym samym blokować oddziaływania ligandu receptor HVEM / LIGHT, skuteczność obserwowana przy traktowaniu LT (3-Ig może być spowodowana hamowaniem jednego lub obu szlaków LT i LIGHT. Aby rozróżnić te możliwości, przetestowano dwa odczynniki na szczurzym EAE: białko fuzyjne HVEM-Ig, które będzie hamować oddziaływanie LIGHT / LTPR bez wpływania na interakcje LTp / a-LTR i blokujące mAb specyficzne dla LT .. W związku z tym zwierzęta traktowano dzień przed immunizacją HVEM-Ig w porównaniu z kontrolą huIgG lub anty-LT. w porównaniu do kontroli monoklonalnej chomika HA4 / 8. Choroba rozwinięta w kohortach huIgG i HA4 / 8, zgodnie z oczekiwaniami (Figura 1c, wypełnione diamenty i kółka, odpowiednio); jednak podawanie HVEM-Ig nie miało wpływu na chorobę (puste kwadraty), pomimo jej zdolności do wiązania LIGHT i wpływania na zabijanie za pośrednictwem LIGHT in vitro (patrz Metody). Ponadto, analiza poziomów HVEM-Ig we krwi myszy wykazała, że ten odczynnik miał dobre właściwości farmakokinetyczne porównywalne z LT (3-Ig (dane nieprzedstawione). Podczas gdy wiązanie LIGHT powinno być blokowane in vivo tym konstruktem, brakuje systemu kontroli in vivo, który reaguje na ten konstrukt. Zatem sygnały za pośrednictwem LT za pośrednictwem LT (3R są wystarczające do indukowania choroby w nieobecności wiązania LIGHT. W przeciwieństwie do traktowania HVEM-Ig, szczury traktowane anty-LT45 wykazują bardzo małe porażenie (otwarte kółka) (P <0,0003, anty-LTa w porównaniu z HA4 / 8 w 12 dniu, szczytowa choroba) [podobne: błonnik witalny opinie lekarzy, bytovia hpu, narodowy fundusz zdrowia sanatorium ] [patrz też: jak przygotować bakłażana, największa wagina na świecie, jak radzić sobie po rozstaniu ] [przypisy: jak przygotować bakłażana, największa wagina na świecie, jak radzić sobie po rozstaniu ]