Nadciśnienie z docelowej ablacji chromograniny A może zostać uratowane przez ortologa człowieka ad 5

Zgodnie z oczekiwaniami, tkanki nie-neuroendokrynne nie wykazywały ekspresji ani genu CHGA, ani genu Chga. Oba geny ulegały ekspresji w tych samych tkankach neuroendokrynnych. Na koniec obecność genu CHGA uratowała podwyższony poziom SBP obserwowany u myszy pozbawionych Chga (Figura 7C). Sugeruje to, że ludzki gen CHGA ma równoważną funkcję do mysiego genu Chga w regulacji SBP. Mamy nadzieję, że ten model myszy (CHGA + / + Chga. /.) Pomoże w funkcjonalnych badaniach genomu nad wyznaczeniem roli ludzkiego CHGA. Figura 7 Charakterystyka humanizowanych myszy CHGA. (A) Schematyczne przedstawienie klonu BAC i linii założycielskiej pokazujące całkowitą integrację transgenu. Klon BAC RP11-862G15, komponent ludzkiego kontigu RR_026437 obejmujący locus pomiędzy 87, 112, 128 i 873799, ma pełny gen CHGA (12 150 bp) oflankowany przez natywne sekwencje ludzkie, 44 068 bp powyżej i 154,651 bp poniżej. Linia założycielska nr. 31 ma kompletny fragment insertu o wielkości 210 kb z RP11-862G15 stabilnie zintegrowany w swoim genomie. (B) Analiza RT-PCR cDNA przygotowanego z myszy pochodzącej od założyciela nr. 31. Ekspresję zarówno mysiego Chga, jak i ludzkich genów CHGA analizowano w różnych tkankach. Analizowane tkanki obejmują nadnercze, trzustkę, przysadkę, jajnik, opuszkę węchową, kory czołową, prążkowie, hipokamp, wzgórze, podwzgórze, pień mózgu, móżdżek, wątrobę i śledzionę. Doświadczenie powtórzono dwukrotnie i uzyskano stałe wyniki. (C) Ratowanie SBP u myszy humanizowanych w locus CHGA. SBP mierzony metodą ogonowego mankietu u dzikiego typu (Chga + / +, n = 8), zerowego (Chga. / ., n = 8) i humanizowanego (CHGA + / + Chga. / ., n = 6) świadomy myszy podczas ograniczeń w wieku 5. 6 miesięcy. Omówienie Morfologia granulatu chromatyny. Chromograniny / sekretograniny od dawna proponowane są do kontrolowania fizycznego procesu tworzenia się wydzielniczych granulek ze względu na ich zależne od pH, wapnia i katecholaminy właściwości agregacyjne (1, 2, 5). Jednak do tej pory brakowało bezpośrednich dowodów na rolę (funkcje) funkcjonalną CHGA in vivo. W Chga. /. myszy, znaleźliśmy około 41. 47% ubytków zarówno pod względem wielkości, jak i liczby granulek chromu (fig. 4 i tabela 1). Takie zmiany w Chga. /. myszy mogą odzwierciedlać utratę głównego składnika rozpuszczalnego rdzenia granulowanej chromatyny, Chga, aw konsekwencji upośledzenie tworzenia kompleksu do przechowywania rdzenia granulki (5). Ostatnio Kim et al. (21) zaproponował, że Chga może działać jako przełącznik typu on / off . w komórkach neuroendokrynnych w celu wywołania biogenezy granulocytów wydzielniczych. W badaniu obejmującym hodowane komórki stwierdzili, że obniżenie ekspresji Chga w komórkach pheochromocytoma szczurzego PC12 (przez antysensowne RNA) spowodowało utratę granulek sekrecyjnych o gęstym rdzeniu, upośledzenie wydzielania transfektowanego prohormonu pod wpływem bodźca i zmniejszenie poziomów takie wydzielnicze markery granulek, takie jak Chgb, karboksypeptydaza E i synaptotagmin (21). Kim i in. (21) wykazali również, że transfekcja bydlęcego CHGA (chociaż nie Chgb) do klonu PC12 szczura z niedoborem Chga może uratować regulowany fenotyp wydzielania i ektopowa ekspresja Chga może spowodować tworzenie gęstych rdzeniowych granulek wydzielniczych nawet w komórkach początkowo bez regulowana droga wydzielnicza. Huh i in. (25) również zgłosili zmniejszoną liczbę granulek wydzielniczych w komórkach PC12 traktowanych małymi interferującymi RNA Chga lub Chgb (25). Tak więc obserwowane spadki liczby i wielkości granulek chromatyny w Chga. /. Myszy (Figura 4 i Tabela 1) zdają się potwierdzać rolę Chga w biogenezie ziarnistych granulek o gęstym rdzeniu in vivo, jak wcześniej zaproponowali in vitro zarówno Kim i in. (21) i Huh et al. (25). Wyrażanie genów komórek chromochłonnych. Ilościowe badania RT-PCR i immunoblot potwierdziły całkowitą ablację ekspresji Chga w Chga. /. myszy (ryc. 2A i 3A). Zauważyliśmy również wzrost ekspresji mRNA innych białek rozpuszczalnych w granulocytach chromochłonnych (Chgb i Scg2, Figura 3, B i C), białek błonowych granulek chromatyny (Vmat1 i Vmat2, Figura 3, D i E) i 2 enzymy biosyntezy katecholamin (Th i Dbh, Figura 3, F i G). W jaki sposób mógł wystąpić taki wzrost ekspresji transkrypcji. Transkrypcja chromogranin / sekretogranin, a także biosyntetycznych enzymów katecholowych, jest wzmacniana przez preganglionowe neuronalne bodźce, takie jak acetylocholina (działająca na nikotynowe receptory cholinergiczne) (26. 29) lub polipeptyd aktywujący cyklazę adenylanową przysadki (28. 30), w proces czasami nazywany sprzężeniem. bodziec-transkrypcja. lub. sprzężenie bodziec-sekrecja-synteza. (26, 27, 31), zdarzenie, o którym wiadomo, że występuje w nerwach współczulnych, a także komórkach chrominowych (32)
[więcej w: zielone koktajle przepisy, leczenie zębów w narkozie, jak przygotować bakłażana ]
[podobne: szczepienie dur brzuszny, makijaz permanentny cena, leczenie zębów w narkozie ]
[więcej w: szczepienie dur brzuszny, makijaz permanentny cena, leczenie zębów w narkozie ]