Nadciśnienie z docelowej ablacji chromograniny A może zostać uratowane przez ortologa człowieka ad 10

Całkowitą objętość wydzielniczych granulek obliczono następnie przez pomnożenie jego gęstości objętościowej przez objętość cytoplazmatyczną komórek chromatyny. Gęstość liczbową wydzielniczych granulek określono zgodnie z nieobciążoną zasadą dwuwymiarową (59) przez policzenie liczby granulek w obszarze odniesienia obejmującym 10. M2 cytoplazmy komórek chromatyny, po nałożeniu przezroczystej nakładki z siatką kratową na elektron. mikrografie komórek. Zostały policzone tylko profile granulek przecięte krawędziami inkluzji (górną i prawą ramką) oraz wewnątrz ramki. Dla każdej grupy (Chga + / + i Chga. /.) Oceniono losowo wybrane komórki chromafinowe z co najmniej 100 mikrografów (> 15 / mysz). Konsekwencje biochemiczne Katecholaminy w osoczu i nadnerczu. Krew pobierano przez przejściowe nakłucie komory, podczas gdy zwierzęta były nieprzytomne po otrzymaniu mieszaniny znieczulenia gryzoni (15 mg / kg ketaminy, 1,6 mg / ml ksylazyny i 0,3 mg / ml acepromazyny; 0,1. 0,15 ml na 25. 30 g myszy; ip) i umieszcza się w lodowatych probówkach zawierających EDTA. Osocze oddzielono i przechowywano w temperaturze ~ 70 ° C aż do użycia. Nadnercza wycięto i zawieszono w 0,5 ml lodowatego 10 mM HEPES, pH 6. Przezroczyste supernatanty homogenatów nadnerczy przechowywano w temperaturze ~ 70 ° C aż do testu. Katecholaminy w osoczu i nadnerczu badano za pomocą czułej metody radioenzymatycznej opartej na O-metylotransferazie katecholowej, jak opisano wcześniej (60). Npy w osoczu i nadnerczu. Npy w próbkach osocza oznaczono ilościowo przy użyciu 50 .l w dwóch powtórzeniach za pomocą zestawu do testu immunoenzymatycznego (Bachem AG) zgodnie z protokołem producenta, wykonując spektrum wzorców wraz z próbkami. Wyniki wyrażono jako pikogramy Npy / mililitr osocza. W celu oceny Npy w nadnerczach, 2 gruczoły zebrano i homogenizowano w 500 ul buforu testowego Npy. Oczyszczone, liofilizowane próbki homogenatu rozpuszczono w buforze testowym o stężeniu 300 ul Npy i rozcieńczono 50-krotnie w tym samym buforze testowym i 50 ul rozcieńczonych próbek w dwóch powtórzeniach zastosowano do oszacowania Npy za pomocą zestawu do testu immunoenzymatycznego, zgodnie z opisem protokół producenta. Białko w każdej próbce (przed 50-krotnym rozcieńczeniem) zmierzono za pomocą odczynnika do testu białkowego Bio-Rad Laboratories, a wyniki wyrażono jako pikogramy Npy / mikrogramy całkowitego białka w nadnerczach. ATP w nadnerczu. Świeżo rozcięte gruczoły nadnercza homogenizowano w 300 ul 10 mM lodowatego HCl (w celu stabilizacji ATP) i wirowano przy 20 000 g przez 25 minut w temperaturze 4 ° C, a klarowny supernatant zebrano i przechowywano w temperaturze. 70 ° C do posługiwać się. Dwadzieścia pięć mikrolitrów lizatów nadnerczowych umieszczono w przezroczystych polistyrenowych probówkach w ultraczułym luminometrze o niskim tle (AutoLumat LB 953; Berthold Technologies GmbH) z rurką fotopowielacza chłodzoną Peltierem (8 ° C). Sto mikrolitrów buforu do testu ATP zawierającego 100 mM octanu Tris, pH 7,8, 10 mM octanu magnezu, mM EDTA, 0,1 mM lucyferynę, mg / ml BSA i 15 ng / ml rekombinowanej lucyferazy QuantiLum (Promega) wstrzyknięto do każdego Rurka i błyskowa luminescencja była rejestrowana jako RLU przez 10 sekund. Jako ślepą próbę zastosowano 10 milimolowy HCl (bez homogenatu nadnerczy). W przypadku krzywej standardowej wartości RLU przeliczono na stężenia ATP (ng / yl), znormalizowane do stężenia białka i wyrażono jako nanogramy / mikrogramy całkowitego białka. Stężenia kortykosteronu w nadnerczu. Określiliśmy stężenia kortykosteronu (stężenia glukozy w gryzoniu) w homogenatach kory nadnerczy przy użyciu zestawu do oznaczania enzymu korrezyjnego EIA Corticosterone (Wzory testowe) zgodnie z protokołem producenta. Stężenia kortykosteronu normalizowano do stężeń białka w próbkach i wyrażano jako pikogramy / mikrogramy całkowitego białka. PRC i PRA. Krew pobierano na lodzie do EDTA (1 mg / ml krwi). Osocze oddzielono i zamrożono w 20 ° C aż do oznaczenia. Plazmę Ang I zmierzono przy użyciu zestawu GammaCoat Plasma Renin Activity 125I-RIA (katalog CA1533; DiaSorin). PRC (w obecności egzogennego substratu reniny) oznaczono przez rozcieńczenie osocza (1: 5) buforem maleinianowym x 1. Jeden mikrolitr rozcieńczonego osocza inkubowano z 14 .l dializowanego szczurzego substratu reninowego i 7 .l buforu maleinianowego. Tę mieszaninę dalej rozcieńczono 2,2 .l buforu do wytwarzania maleinianu i 0,22 .l roztworu PMSF zgodnie z zaleceniami producenta. Po usunięciu i zamrożeniu 10 .l w celu określenia tła w 4 ° C, pozostałą objętość inkubowano przez godzinę w 37 ° C. PRA (pod nieobecność egzogennego substratu reniny) oznaczono przy użyciu 12 .l osocza plus 1,2 .l buforu generacji maleinianu i 0,12 .l roztworu PMSF
[przypisy: szpital powiatowy mikołów, jak radzić sobie po rozstaniu, porozumienie rodzicielskie wzór ]
[patrz też: jak radzić sobie po rozstaniu, bytovia hpu, bytovia hpu pl ]
[podobne: jak radzić sobie po rozstaniu, bytovia hpu, bytovia hpu pl ]