Mucyna komórkowa MUC1 jest krytycznym elementem bariery śluzówkowej dla infekcji ad 10

Penetracja bariery żołądkowo-jelitowej przez C. jejuni po 2 tygodniach u myszy typu dzikiego może wystąpić z powodu postępującego uszkodzenia nabłonka, selekcji bakterii / adaptacji do mikrośrodowiska jelitowego i / lub zmienionego mikrośrodowiska z powodu adaptacyjnych reakcji odpornościowych gospodarza. Wyjaśnienie mechanizmów patogenności stosowanych przez C. jejuni było utrudnione z powodu braku klinicznie istotnych modeli zwierzęcych zakażenia. Dostarczamy obecnie dowodów na to, że C. jejuni wiąże jelitowe jelita, celuje w komórki kubkowe in vivo i wykazuje zwiększoną patogenność przy braku tylko mucyny na powierzchni komórki. Pokazujemy, że MUC1 chroni komórki przed działaniem genotoksyny bakteryjnej, co sugeruje, że mucyny na powierzchni komórek nie są prostymi cząsteczkami blokującymi na powierzchni komórki, ale raczej wyewoluowały szersze role w ochronie komórek nabłonka przed toksynami ksenobiotyków. Polimorfizmy w samych genach mucyn komórkowych, geny kodujące i regulujące glikozylotransferazy, które składają się z ich złożonych węglowodanów, oraz geny, które regulują odpowiednie wytwarzanie i wydzielanie mucyny, mogłyby wszystkie predysponować osoby zarówno do ostrej infekcji, jak i przewlekłej choroby zapalnej. Wyniki tego badania powinny stanowić podstawę do dalszych badań prawidłowej funkcji członków rodziny mucyny na powierzchni komórek i ich wpływu na choroby nabłonkowe. Metody Zwierzęta. Muc1. /. myszy na podłożu 129 / SvJ (43) utrzymywano jako kolonie hodowlane, a myszy Muc1 + / + 129 / SvJ typu dzikiego zakupiono z Instytutu Waltera i Elizy Hall (Melbourne, Victoria, Australia). Myszy były płciowo i wiekiem dobranym w ramach eksperymentów (w wieku 6-12 tygodni, o ile nie zaznaczono inaczej), trzymane w czystych konwencjonalnych warunkach i miały swobodny dostęp do sterylizowanego jedzenia i wody. Wszystkie eksperymenty zostały zatwierdzone przez Komitet ds. Etyki Doświadczeń na Zwierzętach Uniwersytetu w Queensland (zatwierdzenie nr 734/05, 586/04, 389/03 i 200/02). Kolonie rutynowo testowały negatywny wynik mysich wirusowych i bakteryjnych patogenów. Kultura bakteryjna i przygotowanie CDT. Szczepy C. jejuni 81116, 331 i 81-126 hodowano na stałym, wybiórczym agarze (2% agar Columbia, 1% agar bakteriologiczny, 5% odwłókniona krew końska, dodatek selekcyjny Skirrow, Oxoid) w warunkach mikroaerofilnych (5% O2, 15 % CO2, 80% N2, BOC Gazy) w 42 ° C przez 48 godzin. CDT wytworzono z hodowanego C. jejuni 81116 jak opisano (31) z AU odpowiadającym toksynie przygotowanej z 3,7 x 105 bakterii. Szczepy 81-126 i. CDT-B (33) były miłym prezentem od Jamesa G. Foxa (Massachusetts Institute of Technology, Cambridge, Massachusetts, USA). Szczep S. typhimurium 8216915 hodowano na stałym deoksy- rolacie lizyny ksylozy (XLD) lub agarze MacConkey (Oxoid) i inkubowano w 37 ° C przez noc w warunkach tlenowych. Badania wiązania mucyny C. jejuni. Jelitowe wydzielane mucyny (Muc2) oczyszczono z mysich wydzielin śluzowych jelit przez powtarzalną ekstrakcję nierozpuszczalnej mucyny w 6 M chlorowodorku guanidyny (Sigma-Aldrich) (44). Oczyszczone MUC2 powleczono na 96-studzienkowe płytki (z lub bez leczenia z 0,04 U / ml neuraminidazy), dołki następnie zablokowano BSA i do oznaczenia nieswoistego wiązania użyto studzienek bez mucyny, ale zablokowanych BSA. Biotynylowany szczep C.11.uni 81116 (107) ponownie zawieszono w 0,05% Tween 20 i 0,5% ludzkiej albuminy w PBS przy pH 5,0 <7,2. Wiązanie biotynylowanego C. jejuni oceniano za pomocą testu ELISA przy użyciu streptawidyny-HRP, ABTS (Zymed; Invitrogen) jako chromagenu i określenie A405 nm. Leb, sialil-Lex i H typu 2 sprzężone z ludzką albuminą surowicy (IsoSep AB) znakowano izotiocyjanianem fluoresceiny, a 500 ng inkubowano z C. jejuni w PBS zawierającym 0,05% Tween 20 i 0,5% ludzkiej albuminy. Po dwukrotnym przemyciu bakterii przez odwirowanie zmierzono fluorescencję przy użyciu czytnika fluorescencji FLUOstar Optima (BMG LABTECH). Infekcja myszy. Bakterie zebrane z hodowli płytek zawieszono w ogrzanym bulionie Brucella lub bulionie Lauria-Bertani (odpowiednio C. jejuni i S. typhimurium) i liczbę organizmów oznaczono przez A410 nm stosując krzywą standardową. W serii eksperymentów myszy zaszczepiono doustnie 102. 108 CFU C. jejuni lub 102. 103 CFU S. typhimurium i uśmiercono w wielu punktach czasowych przez dyslokację szyjki macicy. Narządy przewodu pokarmowego (jelito grube, jelito cienkie i żołądek) oraz narządy ogólnoustrojowe (śledziona, wątroba i płuca) zostały wypreparowane, a naprzemienne próbki zebrano w bulionie lub 10% formalinie. Aby ocenić liczbę CFU / g tkanki, próbki w bulionie homogenizowano, seryjnie rozcieńczano, umieszczano na selektywnym agarze i hodowano jak powyżej. Zmniejszenie fagocytów [przypisy: bytovia hpu pl, bytovia hpu, szpital powiatowy mikołów ] [przypisy: błonnik witalny opinie lekarzy, narodowy fundusz zdrowia sanatorium, dlaczego ziewanie jest zaraźliwe ] [więcej w: błonnik witalny opinie lekarzy, narodowy fundusz zdrowia sanatorium, dlaczego ziewanie jest zaraźliwe ]