Kwasy żółciowe obniżają poziom trójglicerydów poprzez szlak obejmujący FXR, SHP i SREBP-1c ad 6

Z tego powodu wygenerowaliśmy szereg konstruktów reporterów zawierających mutacje punktowe w dwóch wcześniej opisanych elementach odpowiedzi LXR (LXRRE, S6). Jak oczekiwano, aktywność promotora SREBP-1c jest indukowana przez nadekspresję RXR / LXR. heterodimer w komórkach wątrobiaka wątrobowego szczura McA-RH7777 w obecności naturalnego agonisty LXR i syntetycznego liganda RXR (10,11, 34). Gdy miejsca LXRRE są zmutowane lub usunięte, podstawowa aktywność promotora jest znacznie zmniejszona (S5 i S6, Figura 3E). Jest prawdopodobne, że efekt ten jest zachowany pomiędzy myszami i ludźmi, ponieważ ekspresja SREBP-1c jest również indukowana przez agonistę LXR w ludzkich komórkach wątrobiaka i pierwotnych hepatocytach (34, 35). Ponadto oba LXRRE są wysoce konserwatywne między myszą a ludzkim promotorem SREBP-1c (Figura 3D). Transfekcja wywołana LRH-1 indukowała aktywność promotora SREBP-1c i poprawiła wielkość indukcji LXR aktywowanym ligandem, co sugeruje, że LRH-1 działa jako czynnik kompetycyjny dla LXR, jak opisano dla wielu genów (17, 18, 36). (Figura 3E). Indukcja promotora SREBP-1c przez LRH-1 została utracona po usunięciu LXRREa (S4, Figura 3E). Stwierdzenie, że region promotora między a 327 i a 276 nie zawierał elementu odpowiedzi LRH-1 zgodnego (LRH-1RE) sugerował, że indukcja może być mediowana przez LXRREa. Mutacja 5. Rozszerzenie tego LXRRE, które nie zakłóca samej sekwencji konsensusowej LXRRE, doprowadziło do utraty odpowiedzi na LRH-1 (S7, Figura 3E), co jest zgodne z sugestią, że LXRREa może pośredniczyć w odpowiedzi SREBP- 1c do LRH-1. Co ciekawe, kotransfekcja z SHP silnie osłabiała indukcję reportera SREBP-1c w obecności LRH-1, LXR i RXR (Figura 3E). Na tej podstawie wyciągamy wniosek, że SHP reguluje promotor SREBP-1c. Ze względu na problemy techniczne (utrata podstawowej aktywności promotora po mutagenezie LXRRE), nie możemy przypisać tego efektu z pewnością do konkretnego miejsca w promotorze. CA osłabia in vitro lipogenezę agonisty LXR. Aby bardziej szczegółowo zbadać hamowanie promotora SREBP-1c przez CA, karmiono myszą C57BL / 6J, karmą dla zwierząt lub karmą uzupełnioną 0,5% CA przez dzień. Myszy podano zwierzętom agonistę LXR T0901317 lub nośnik i różne diety kontynuowano jeszcze przez jeden dzień, po czym myszy uśmiercano. Potwierdziliśmy wcześniej obserwowaną indukcję masy wątroby i TG w surowicy przez agonistów LXR na diecie z karmą dla dzieci (10, 11, 34). Jednoczesne podawanie CA całkowicie zapobiegło tym skutkom (rysunek 4A). Zgodnie z oczekiwaniem, indukowano oba geny docelowe LXR (SREBP-1c, CYP7A1, ABCA1, ABCG5, ABCG8 i ANGPTL3) i SREBP-1c (ME, ACC1 i ACC2) przez podanie ligandu LXR. Jednoczesne podanie CA zwiększyło ekspresję SHP i uniemożliwiło indukcję SREBP-1c i jego docelowych genów. Interesujące jest to, że niektóre geny docelowe LXR były obniżone przez CA (SREBP-1c, CYP7A1 i ANGPTL3), podczas gdy inne (ABCA1, ABCG5 i ABCG8) nie były (Figura 4B). To doprowadziło nas do wniosku, że nie wszystkie geny docelowe LXR reagują na hamowanie przez SHP, co sugeruje, że oprócz LXR może być dodatkowy czynnik (czynniki) kierowany przez CA w celu wyjaśnienia ich skutecznej regulacji. Figura 4CA tłumi lipogenezę wywołaną agonistą LXR in vivo. (A) Masa wątroby i TG w surowicy po karmieniu dietą zawierającą CA i jednoczesnym podawaniem agonisty LXR T0901317 (wiek 11 tygodni, n = 6). (B) Hepatyczne poziomy ekspresji SREBP-1c, CYP7A1, ME, ACC1, ACC2, ABCA1, ABCG5, ABCG8, ANGPTL3 i SHP, jak określono za pomocą ilościowego RT-PCR (n = 4). Tłumienie działania agonistów FXR obniżających poziom TG w SHP. /. myszy. Aby krytycznie przetestować rolę SHP w obniżaniu biosyntezy TG, podawaliśmy albo dietę zawierającą 0,5% CA albo syntetycznego agonistę FXR GW4064 myszom z dzikim i SHP-null i mierzono TG w surowicy po 0, 3 i 7 dniach . CA i GW4064 znacząco obniżyły TG w surowicy u myszy SHP + / +. CA wydawał się silniejszy w zmniejszaniu TG w surowicy, co można przypisać słabemu profilowi farmakokinetycznemu GW4064. Co ważniejsze, to zmniejszenie TG w surowicy zostało całkowicie zniesione w SHP. /. myszy (Figura 5A). Aby ustalić, czy to osłabienie efektów agonistycznych FXR powodujących TG w SHP. /. myszy porównywano podobnymi zmianami na poziomie molekularnym, zmierzono wątrobową ekspresję SREBP-1c, ME, CYP7A1 i ANGPTL3 u zwierząt uśmierconych po jednodniowym traktowaniu różnymi agonistami FXR. Ekspresja wszystkich czterech genów została znacznie zmniejszona u myszy SHP + / +, które otrzymały CA lub GW4064 (Figura 5B). Stanowi to wyraźny kontrast z wynikami uzyskanymi w SHP. /. myszy, w których nie wykryto spadku ekspresji (Figura 5B)
[patrz też: leczenie zębów w narkozie, zielone koktajle przepisy, poradnia rodzinna zdrowie ]
[hasła pokrewne: leczenie zębów w narkozie, szpital powiatowy mikołów, porozumienie rodzicielskie wzór ]
[więcej w: leczenie zębów w narkozie, szpital powiatowy mikołów, porozumienie rodzicielskie wzór ]