Identyfikacja ludzkiego współczynnika konduktów 1 z moczem jako nowego inhibitora wzrostu kryształów szczawianu wapnia ad

Inna grupa kamieniotwórców produkuje głównie (> 50%) kamieni fosforanu wapnia; z nich jedna czwarta zawiera pędzel (CaHPO4 . 2H2O), który reprezentuje wczesną fazę powstawania kamienia fosforanowego (19, 20). Stopień przesycenia szczeliwa zależy bezpośrednio od wapnia w moczu (21), a pacjenci z kamieniami mułowymi mają związane z nimi hiperkalciurię absorpcyjną typu I i dystalną nerkową kwasicę nerkową (20). Kamienie kostki bruzdowej ulegają zmianom histopatologicznym, które łączą płytki śródmiąższowe kamiennych formantów CaOx z wewnątrzpłytkowymi zatyczkami apatytowymi znajdującymi się w pomostach bocznikowych; innymi słowy, ich histopatologia jest połączeniem CaOx i obwodowej choroby kamieni (19). Nidus brushite może wywoływać heterogenne zarodkowanie lub wzrost epitaksjalny CaOx; w związku z tym brushit jest związany z tworzeniem zarówno hydroksyapatytu [Ca10 (PO4) 6 (OH) 2], jak i kamieni CaOx (20). Z drugiej strony wielu pacjentów z kamieniami typu brushite początkowo miało kamienie CaOx (19). Niezależnie od tego, czy wewnątrzpochodne lub śródmiąższowe odkładanie się kryształów jest głównym patogennym mechanizmem choroby kamicy nerkowej, pozostaje do wyjaśnienia. Jest mało prawdopodobne, że pojedynczy mechanizm lub ścieżka może wyjaśnić wszystkie formy kamieni nerkowych. Być może u pacjenta występuje kilka mechanizmów powstawania kamieni. W niniejszym badaniu skupiliśmy naszą uwagę na oczyszczeniu, identyfikacji i analizie funkcjonalnej nowego inhibitora wzrostu kryształu CaOx i jego potencjalnej roli w patogennych mechanizmach kamicy nerkowej. Obecnie znanymi białkami hamującymi kamień są nephrocalcin (22), białko Tamm-Horsfall (23), uropontin (24), inhibitor inter. -Trypsyna (bikunina) (25) i fragment protrombiny z moczu (białko z matrycą krystaliczną) (26) . Co ciekawe, te kamienne inhibitory mają podobne właściwości fizyczne i chemiczne; są małymi anionowymi białkami, które wiążą się z wapniem i hamują wzrost lub agregację kryształów CaOx. Zidentyfikowano tylko kilka dodatkowych białek jako inhibitory powstawania kamieni (27-29). W niniejszym badaniu, oczyszczono i zidentyfikowano nowy inhibitor wzrostu kryształu CaOx, mianowicie współczynnik krowy moczowej (TFF1), pochodzący z normalnego ludzkiego moczu, stosując konwencjonalne metody biochemiczne i najnowsze postępy w dziedzinie spektrometrii mas (MS). Obecność TFF1 w moczu została potwierdzona przez analizę Western blot i scharakteryzowano jej aktywność hamującą wobec wzrostu kryształów CaOx. Na koniec oceniano różnice w stężeniach i względnych ilościach TFF1 w moczu u pacjentów z idiopatycznym kamieniem CaOx i zdrowych osób zdrowych. Wyniki Izolacja białek anionowych i badania przesiewowe pod kątem potencjalnych inhibitorów wzrostu kryształów CaOx. W niniejszym badaniu skupiono się na anionowych białkach w moczu, ponieważ wszystkie białka, które hamują wzrost kryształów CaOx są anionowe i ponieważ białka w moczu mogą bezpośrednio wpływać na wzrost kryształów i tworzenie się kamieni. Metody oczyszczania zastosowane w niniejszym badaniu podsumowano na Figurze 1. W skrócie, próbki moczu otrzymane od normalnych zdrowych dawców zaadsorbowano na celulozie DEAE i odzyskano przez elucję okresową (5 .l na dawcę). Anionowe białka następnie rozdzielano zależnie od wielkości na kolumnie do filtracji HiLoad 16/60 Superdex 75 (Figura 2A). Wszystkie frakcje białek badano pod kątem pomiaru aktywności hamującej wobec wzrostu kryształów CaOx (Figura 2B). Co ciekawe, pik aktywności hamującej wzrost kryształów CaOx był obecny we frakcjach, które miały najniższe stężenie (najniższa OD, a 214 nm). 8 kolejnych frakcji, które zawierały tę aktywność, połączono do dalszej analizy i oznaczono frakcję X. Figura Schematyczne podsumowanie procedur analitycznych w niniejszym badaniu. Normalne ludzkie białka moczu oczyszczono stosując adsorpcję DEAE (izolacja białek anionowych), filtrację żelu HiLoad 16/60 Superdex 75 (rozdział wielkości) i chromatografię anionowymienną Q z wymywaniem gradientowym 0. 0,5 M NaCl (rozdział z ładunkiem). Białko w połączonej frakcji o silnej aktywności hamującej wzrost kryształów CaOx zidentyfikowano za pomocą MALDI-TOF MS i ESI-Q-TOF MS / MS. Następnie sprawdzono ekspresję i funkcję zidentyfikowanych białek. Figura 2 Ekspresja i profile funkcjonalne anionowych białek w moczu. (A) Po zakończeniu adsorpcji DEAE, anionowe białka rozdzielono stosując filtrację żelu HiLoad 16/60 Superdex 75, a peptydy analizowano ilościowo za pomocą spektrofotometrii przy a 214 nm. (B) Mierzono hamującą aktywność wobec wzrostu kryształów CaOx dla każdej frakcji (patrz Metody). Frakcja X była obszarem o małej objętości, ale wykazywała silną aktywność hamującą
[podobne: rezonans magnetyczny otwarty warszawa, leczenie zębów w narkozie, jak radzić sobie po rozstaniu ]
[więcej w: jak przygotować bakłażana, największa wagina na świecie, jak radzić sobie po rozstaniu ]
[więcej w: jak przygotować bakłażana, największa wagina na świecie, jak radzić sobie po rozstaniu ]