Identyfikacja ludzkiego współczynnika konduktów 1 z moczem jako nowego inhibitora wzrostu kryształów szczawianu wapnia ad 7

Nasze dane wyraźnie wykazały, że TFF1 w moczu w stężeniu 7 ng / ml hamuje wzrost kryształów CaOx. Znaczące działanie hamujące wykazano po 10 minutach. inkubacja i pozostała istotna do końca testu (1 godzina). Okres inkubacji był dłuższy niż w doświadczeniach, w których badano znacznie wyższe stężenia TFF1 (Figura 7). Ponadto, odnotowaliśmy różnice w stężeniach i względnych ilościach (znormalizowane z Cr w moczu i całkowitym białkiem) TFF1 w moczu pacjentów z idiopatycznym kamicą nerkową CaOx w porównaniu z tymi w normalnym moczu (Figura 9). Różnice (2,5-krotna różnica w stężeniu, 5-krotnie znormalizowana względem Cr w moczu i 22-krotnie znormalizowana do całkowitego białka w moczu; Figura 9) były oczywiste i wskazują, że TFF1 w moczu odgrywa ważną rolę, przynajmniej częściowo, w patogeniczne mechanizmy choroby kamicy nerkowej CaOx. Istnieją jednak inne mechanizmy patogenne i kilka innych inhibitorów kamieni (znanych i nieznanych), które mogą współpracować w celu modulowania powstawania kamieni, a TFP1 w moczu jest tylko jednym z wielu czynników. Aby lepiej zrozumieć patogenezę i patofizjologię kamicy nerkowej, konieczna jest integracyjna analiza tych różnych mechanizmów w dużym badaniu kohortowym. Metody Niniejsze badanie zostało zaakceptowane przez Instytucjonalny Komitet Etyczny Wydziału Medycyny Siriraj Hospital, Uniwersytet Mahidol oraz przez Komitet ds. Przeglądu Etycznego w Ministerstwie Zdrowia Publicznego w Tajlandii. Metodologie zastosowane w niniejszym badaniu obejmowały adsorpcję anionową DEAE, filtrację żelową z użyciem HiLoad 16/60 Superdex 75 (Amersham Biosciences), chromatografię anionowymienną Resource Q z elucją z gradientem liniowym (Amersham Biosciences), testem hamowania wzrostu kryształów CaOx, MALDI- TOF MS, ESI-Q-TOF MS / MS, analiza Western blot i ELISA. Schemat tych procedur analitycznych przedstawiono na rycinie 1. Pacjenci. Próbki moczu pobrano od 30 zdrowych osób, które ostatnio nie przyjmowały leków (14 mężczyzn i 16 kobiet, w wieku 26,1. 2,9 lat) i 23 pacjentów z idiopatycznym kamicą nerkową CaOx (12 mężczyzn i 11 kobiet, wiek 45,3. 10,7 lat). U 18 pacjentów wystąpiła choroba kamicy nerkowej o nowym początku (pierwszy epizod), podczas gdy pozostałe 5 miało nawracającą (drugi epizod) chorobę kamienia nerkowego. Pięciu pacjentów miało kamień, 4 pacjentów miało 2 kamienie, a 14 pozostałych miało 5 lub więcej kamieni. Kamienie różniły się rozmiarem od 1,0 do 5,0 cm. Skład chemiczny kamieni analizowano za pomocą spektroskopii w podczerwieni z transformatą Fouriera. Osiemnastu pacjentów miało kamienie monohydratu CaOx, podczas gdy pozostałe 5 miało dihydrat wapnia CaOx. Pacjenci z wtórnymi przyczynami kamicy nerkowej CaOx lub zaburzeniami ogólnoustrojowymi (np. Pierwotna nadczynność przytarczyc, sarkoidoza, nadmiar witaminy D, nadczynność tarczycy i kwasica kanalikowo-nerkowa) i ci, którzy przyjmowali diuretyki, zostali wykluczeni. Staghorn kamienie nerkowe i kamienie zawierające kwas moczowy, struwit, cystynę lub ponad 50% fosforanu wapnia były wykluczone. Żaden z dawców nie miał ostatnio zakażenia dróg moczowych. Pobieranie moczu. W celu wstępnego skriningu, izolacji i identyfikacji białek anionowych o działaniu hamującym względem wzrostu kryształów CaOx, wykorzystaliśmy dużą objętość próbek moczu (po 5 l) pobranych od 2 zdrowych osób w butelkach zawierających 1% azydku sodu w okresie 2 3 kolejne dni i przechowywano w 4 ° C przez cały okres pobierania próbek. Aby zweryfikować początkowe dane spektrometryczne mas i aby potwierdzić tożsamość białka za pomocą analizy Western blot, użyliśmy mniejszej objętości próbek moczu (po 50 ml) pobranych od 4 zdrowych osób. Aby zmierzyć poziomy TFF1 w moczu u wszystkich dawców (n = 53) za pomocą ELISA, użyto tylko 10 ml moczu od każdego dawcy. Większa objętość została przetworzona podczas wstępnego badania przesiewowego, ponieważ chcieliśmy zbadać wszystkie białka anionowe o działaniu hamującym wzrost kryształów CaOx, w tym składniki o niskiej liczebności. Szczątki komórek i cząstki stałe zostały usunięte z próbek moczu przez 1000 g wirowania w temperaturze 4 ° C przez 30 minut, a supernatant odzyskano. DEAE celulozowa anionowa adsorpcja (izolacja anionowych białek). Ponieważ wszystkie znane białka moczu, które hamują wzrost kryształów CaOx są anionowe (być może związane z Ca2 +), wyizolowaliśmy białka anionowe przy użyciu adsorpcji DEAE. Mocz rozcieńczono 4-krotnie wodą dejonizowaną (dł. 18 M. Cm), a jej pH doprowadzono do 7,3. Celulozę DEAE (DE-52, Whatman), która została zrównoważona buforem zawierającym 0,01 M Tris-HCl i 0,05 M NaCl (pH 7,3), dodano do moczu i mieszano w temperaturze pokojowej przez 30 minut
[przypisy: leczenie zębów w narkozie, jak przygotować bakłażana, bytovia hpu ]
[przypisy: chusteczki antybakteryjne, błonnik witalny opinie lekarzy, narodowy fundusz zdrowia sanatorium ]
[patrz też: chusteczki antybakteryjne, błonnik witalny opinie lekarzy, narodowy fundusz zdrowia sanatorium ]