Identyfikacja ludzkiego współczynnika konduktów 1 z moczem jako nowego inhibitora wzrostu kryształów szczawianu wapnia ad 6

Ta różnica pozostała wysoce znacząca po normalizacji z całkowitym białkiem (11,08 . 3,21 wobec 247,27. 53,68 ng / mg białka całkowitego). * P <0,0001. Tabela Dane kliniczne pacjentów z idiopatycznym kamicą nerkową CaOx Dyskusja [0010] Proponuje się, że inhibitory wzrostu kryształów CaOx (białka, lipidy, glikozoaminoglikany i związki nieorganiczne) odgrywają ważną rolę w chorobie kamienia nerkowego od kilku dekad (35, 36). Chociaż poczyniono pewne postępy w charakteryzowaniu tych inhibitorów, wiedza o białkach, które mogą hamować tworzenie się kamieni, jest ograniczona do stosunkowo niewielkiej liczby białek. Identyfikacja dodatkowych białek hamujących kamień była w przeszłości utrudniona przez ograniczenia w metodach identyfikacji białka, co oznaczało, że składniki o niskiej obfitości lub nowe białka nie mogły zostać zidentyfikowane bez wcześniejszej wiedzy o ich zaangażowaniu. Dlatego niezbędne są badania odkrywcze wykorzystujące nowoczesne technologie do zdefiniowania nowych inhibitorów wzrostu kryształów CaOx, które mogą prowadzić do lepszego zrozumienia patogenezy i patofizjologii kamicy nerkowej. W niniejszym badaniu zidentyfikowaliśmy ludzki TFP w moczu jako nowy inhibitor wzrostu kryształów CaOx, stosując kombinację konwencjonalnych metod oczyszczania biochemicznego i ostatnich postępów w identyfikacji białek spektrometrii masowej. Początkowo przesiewaliśmy pod kątem kandydatów białka z dużej objętości normalnego ludzkiego moczu w celu zbadania wszystkich białek anionowych o działaniu hamującym wzrost kryształów CaOx. Takie podejście pozwoliło nam oczyścić białka o niskiej obfitości, których nie udało się zidentyfikować w poprzednich badaniach, w których wykorzystano mniejszą objętość moczu (37, 38). Oczyszczanie prowadzono systematycznie, w tym anionową adsorpcję, rozdzielanie wielkości i na koniec rozdzielanie gęstości ładunku. Skupiliśmy się na frakcji X w niniejszym badaniu. Ta frakcja była jedną z wielu frakcji, które wykazywały działanie hamujące wzrost kryształów CaOx. Rozpoczęliśmy szerokie profilowanie wszystkich tych frakcji z aktywnością hamującą wzrost kryształów CaOx w większej liczbie próbek. Charakteryzacja i analizy funkcjonalne innych frakcji będą miały dodatkowy znaczący wpływ na aktualną wiedzę na temat modulatorów powstawania kamieni. TFF1 jest ogólnie znany jako produkt genu indukowalny przez estrogeny z 60 resztami aminowymi (39. 41). Należy do rodziny białek z rodziny koniczyli, ulega ekspresji przeważnie w błonie śluzowej żołądka i jest syntetyzowany przez komórki nabłonka śluzówki (42, 43). Ma działanie antyapoptotyczne i motogenne, a jego główne funkcje w przewodzie żołądkowo-jelitowym obejmują utrzymywanie integralności błon śluzowych i naprawę śluzówki w odpowiedzi na stan zapalny lub uraz (44, 45). TFF1 został zidentyfikowany wcześniej w ludzkim moczu przy użyciu testu radioimmunologicznego i analizy Western blotting (34, 46). Jednak jego rola w nerkach i moczu nie została zdefiniowana. Po raz pierwszy, zgodnie z naszą wiedzą, raportujemy działanie hamujące wzrost kryształów CaOx TFF1 w ludzkim moczu. W badaniach walidacji funkcjonalnej przy użyciu przeciwciał anty-C-końcowych i anty-N-terminalnych TFF1, ten pierwszy był bardziej skuteczny w neutralizowaniu hamującej aktywności TFF1 w moczu przeciwko wzrostowi kryształów CaOx. Potwierdza to pogląd, że koniec C TFF1 może być regionem TFF1 odpowiedzialnym za aktywność hamującą wzrost kryształów CaOx. Cztery z 6 C-końcowych reszt aminokwasowych TFF1 to kwas glutaminowy. Dlatego postulujemy, że reszty kwasu glutaminowego na końcu C moczowego TFF1 wiążą się z Ca2 +. Poprzednie badania wskazywały, że dimeryzacja TFF1 odgrywa kluczową rolę zarówno w jego właściwościach motogennych, jak i ochronnych / leczniczych (47). Nasze wstępne dane pokazały, że dimer TFF1 miał silniejszą aktywność hamującą względem wzrostu kryształów CaOx niż monomeryczna postać przy tym samym stężeniu molowym. Sugeruje to, że koniec C moczowego TFF1 wiąże się z Ca2 + i że jego dimeryzacja w moczu (przy Cys58 Cys58) (30) ułatwia uwięzienie jonów Ca2 + (48, 49), a tym samym powoduje zahamowanie wzrostu kryształów CaOx (Figura 10) . Figura 10 Proponowany model miejsca wiązania Ca2 + w cząsteczkach TFF1. W oparciu o dane funkcjonalne na Figurze 7D, oraz ponieważ koniec C zawiera liczne reszty glutaminowe, które są naładowane ujemnie, w związku z tym przypuszczamy, że obszar ten jest szczególnie ważny w pośredniczeniu w hamującej wzrost funkcji TFO2 za pomocą funkcji wzrostu kryształów CaOx. Ponieważ dimeryzacja zwykle występuje w natywnej postaci TFF1 (Cys58Cys58) (30), proponujemy również, że dimeryzacja TFF1 może ułatwiać uwięzienie jonów Ca2 + w tym obszarze. Funkcjonalne znaczenie TFF1 zostało potwierdzone przez ocenę jego aktywności hamującej na poziomach fizjologicznych w ludzkim moczu
[patrz też: laboratorium pruszcz gdański, zielone koktajle przepisy, chusteczki antybakteryjne ]
[hasła pokrewne: szpital powiatowy mikołów, porozumienie rodzicielskie wzór, poradnia rodzinna zdrowie ]
[patrz też: szpital powiatowy mikołów, porozumienie rodzicielskie wzór, poradnia rodzinna zdrowie ]