Hepatic Niemann-Pick C1 Jak 1 reguluje stężenie cholesterolu w żółci i jest celem ezetymibu cd

Zamrożone skrawki acetonu utrwalone w próbkach wątroby od 3-miesięcznych myszy L1-Tg112 i samców myszy WT karmionych dietą 0,015% cholesterolu były przetwarzane pod kątem immunohistochemii fluorescencyjnej z przeciwciałem Bsn4052 z ludzkim NPC1L1 i mysim monoklonalnym przeciwciałem C219 przeciw ABCB1, jak opisano w Methods. Strzałki oznaczają wybrzuszenia kanałowe na odcinku wątroby L1-Tg. Oryginalne powiększenie, × 630. Paski skali: 10 .m. (B) Immunohistochemię fluorescencji ludzkiego NPC1L1 prowadzono jak opisano w Methods, a skrawki badano natychmiast przy użyciu mikroskopu fluorescencyjnego Axioplan 2. Zdjęcia zostały wykonane, aby pokazać region triady wątroby. Wykorzystano zieloną autofluorescencję z elastyn w ścianie naczynia krwionośnego, aby odróżnić przewód żółciowy od naczyń krwionośnych. Strzałki oznaczają wzór kanału (czerwień rodaminowa) ludzkiego barwnika NPC1L1 przez Bsn4052 w wątrobie L1-Tg. Zielona i czerwona plama wydaje się biała. a, tętnica; b, przewód żółciowy; v, żyły. Oryginalne powiększenie, × 630. (C) Zamrożone fragmenty ludzkiej wątroby z utrwalonymi acetonami poddano obróbce immunohistochemicznej z użyciem fluorescencyjnej surowicy surowicy C219, Bsn4052 i Bsn4052, jak opisano w Methods, a skrawki badano przy użyciu mikroskopu fluorescencyjnego Axioplan 2. Strzałki oznaczają kanałowe wybarwienie ludzkiego NPC1L1 przez Bsn4052 i jego kolokalizację z ABCB1 barwionym przez C219. Pręty skali: 35 m. Poziom cholesterolu w żółci zmniejsza się selektywnie u myszy L1-Tg. W celu zbadania hipotezy, że wątrobowy NPC1L1 moduluje wydalanie cholesterolu z żółcią, mierzono skład lipidów żółci pęcherzyka żółciowego u myszy L1-Tg (Figura 3A). Po karmieniu dietą 0,015% cholesterolu myszy L1-Tg20 i L1-Tg112 wykazały odpowiednio 13-krotny i 23-krotny spadek w stężeniu cholesterolu pęcherzykowego w porównaniu z myszami WT, podczas gdy stężenia fosfolipidów (PL) i BA utrzymywały się w dużej mierze. Karmienie diety 0,2% w porównaniu z 0,015% cholesterolu powodowało wzrost stężenia cholesterolu pęcherzykowego u myszy wszystkich genotypów. Jednak stężenie cholesterolu myszy L1-Tg20 i L1-Tg112 było odpowiednio 5- i 12-krotnie niższe, niż u myszy WT. Nie stwierdzono znaczących różnic w stężeniu pęcherzyka żółciowego lub stężenia BA w diecie 0,2% cholesterolu. Ponieważ żółć można skoncentrować w pęcherzyku żółciowym, potencjalnie zmieniając stężenie lipidów, obliczono stosunki molowe lipidów żółciowych. Procenty molowe żółciowego cholesterolu myszy L1-Tg20 i L1-Tg112 były 14- i 19-krotnie niższe na diecie 0,015% cholesterolu i 5- i 10-krotnie niższe na diecie z 0,2% cholesterolu, w porównaniu do myszy WT. Myszy L1-Tg miały nieznacznie wyższe procenty molowe BA i niezmienione stosunki molowe PL na obu dietach w porównaniu z myszami WT. Figura 3 Wrażliwa ekspresja NPC1L1 powoduje dramatyczną redukcję cholesterolu w żółci, ale nie PL i BA. (A) Stężenie cholesterolu pęcherzyka żółciowego, PL i BA u samców myszy określono jak opisano w Methods. Stosunki molowe każdego lipidu w całkowitych lipidach żółciowych obliczono ze stężeń lipidów. Dane są średnie. SEM z 4. 6 próbek. (B i C) Wszystkie mRNA wątroby lub białka błonowe przygotowano w sposób opisany uprzednio (50) z myszy w A i połączono równe ilości mRNA lub białka z każdej myszy w grupie (n = 5 na grupę). Poziomy wybranych mRNA i białek określono, odpowiednio, za pomocą ilościowej reakcji PCR w czasie rzeczywistym (B) i immunoblottingu (C), jak opisano wcześniej (10, 50). RAP zastosowano jako kontrolę obciążenia, a ludzki NPC1L1 poddano immunoblottingowi z L1Ab do walidacji genotypu. Doświadczenie powtórzono dwukrotnie z różnymi zestawami zwierząt i otrzymano podobne wyniki. P <0,05 między * i grupami dla każdego pomiaru (ANOVA). Ponieważ brak ABCG5 i / lub ABCG8 zaburza wydzielanie cholesterolu z żółcią (11, 23. 25), istnieje możliwość, że ekspresja NPC1L1 pośrednio zmieniała zawartość cholesterolu w żółci poprzez zmniejszenie poziomów wątrobowych tych białek. Tak więc poziomy mRNA i białka ABCG5 w wątrobie i ABCG8 określono na myszach karmionych dietą 0,015% lub 0,2% cholesterolu. W obu dietach poziom mRNA ABCG5 i ABCG8 był nieco wyższy u myszy L1-Tg112 w porównaniu do myszy WT (Figura 3B). Podczas gdy ilości białek ABCG5 i ABCG8 pozostały niezmienione na diecie 0,015% cholesterolu, wydawało się, że białko ABCG5 jest nieznacznie zwiększone w wątrobie L1-Tg w porównaniu z wątrobą WT na diecie 0,2% cholesterolu (Figura 3C). Niezależnie od genotypu, spożycie diety o zawartości 0,2% cholesterolu spowodowało oczekiwany wzrost liczby mRNA i białek ABCG5 w wątrobie w porównaniu z dietą 0,015% cholesterolu, ponieważ 2 geny są celami receptora X wątroby (LXR) (26) [hasła pokrewne: bytovia hpu pl, największa wagina na świecie, bytovia hpu ] [więcej w: szpital powiatowy mikołów, porozumienie rodzicielskie wzór, poradnia rodzinna zdrowie ] [patrz też: szpital powiatowy mikołów, porozumienie rodzicielskie wzór, poradnia rodzinna zdrowie ]