Brodawka nerek jest niszą dla komórek macierzystych nerki dorosłych cd

Podwójne barwienie immunologiczne z przeciwciałem przeciwko BrdU i przeciwciałem przeciwko czynnikowi von Willebranda wykazało, że komórki zachowujące BrdU były blisko związane z komórkami śródbłonka, ale sygnał BrdU i sygnał von Willebranda nie pokrywały się (Figura 2I). Stwierdzenie, że brodawka dorosłej nerki ssaka ma populację komórek rzadko dzielących się, zostało potwierdzone u myszy; 3-dniowe młode otrzymały BrdU i zbadano ich dorosłe nerki. Figura 3 pokazuje wyniki dla nerki 3-miesięcznej myszy barwionej na BrdU (FITC fluorescyna) i przeciwciało przeciwko kolagenowi IV (rodaminę). Podczas gdy zewnętrzna kora (Figura 3A), podobnie jak inne części nerki (nie pokazane), rzadko zawierała komórki zatrzymujące BrdU, brodawka nerkowa (Figura 3B) miała dużą liczbę tych komórek. Figura 3BrdU-zatrzymujące komórki w dorosłej nerce myszy. (A i B) Widoki kompozytowe 60 .m w odcinkach nerki od 2-miesięcznej myszy otrzymanej przez mikroskopię konfokalną z 2. M optycznymi przekrojami. (A) Kora zewnętrzna bez komórek BrdU-dodatnich. (B) Brodawka zewnętrzna z obfitymi komórkami zatrzymującymi BrdU. Skalowane pręty: 50 .m. Izolacja komórek brodawkowatych nerki. Zdyspergowane komórki z dorosłej brodawki nerkowej wysiewano na plastiku lub na płytkach powleczonych fibronektyną i hodowano w hodowli tkankowej. W porównaniu z plastikiem, fibronektyna zwiększała szybkość proliferacji komórkowej i zmniejszała liczbę agregatów komórkowych (patrz poniżej), ale nie zauważono żadnych innych różnic, gdy komórki były zaszczepiane na tej macierzy. Bardzo niewiele komórek przeżyło izolację; analiza cytometrii przepływowej trzech niezależnych doświadczeń wykazała, że z brodawek nerkowych 6 szczurów, około 2 x 106 do 3 x 106 komórek było żywych, jak zdefiniowano przez wykluczenie jodku propidyny (nie pokazano), ale zaszczepienie tych komórek skutkowało mniej niż × 104 komórek około 7 dni po izolacji. Izolacja komórek w warunkach hipertonicznych przez dodanie 500 mM mocznika i 350 mM NaCl do wszystkich buforów i pożywek hodowlanych nie zwiększyła wydajności komórek. Przez pierwsze 2 dni po wyizolowaniu i pomimo faktu, że komórki wyizolowano przez filtrację przez filtr 20 .m, komórki brodawkowe utworzyły agregaty, przy czym ZO-1 był wykrywalny w połączeniach międzykomórkowych (Figura 4A). Aby określić częstotliwość, z jaką izolowane brdU komórki brodawkowe nerkowe zostały wyizolowane za pomocą naszej procedury, hodowaliśmy komórki brodawkowe od dorosłych szczurów obciążonych BrdU w wieku 3 dni, a następnie 2-miesięczną pogoń. Po 2 dniach izolacji komórki przylegały do naczynia hodowlanego i możliwa była kwantyfikacja komórek BrdU-dodatnich. W trzech niezależnych izolacjach każda pochodzi od 6 szczurów, średnio 40%. 6% komórek było komórkami utrzymującymi BrdU (przykład pokazano na Figurze 4, B i C). Ryc. 4Renalne komórki brodawkowe hodowane w hodowli komórkowej. (A) Izolowane komórki brodawkowe nerki hodowane w standardowych warunkach hodowli komórkowej tworzyły agregaty komórkowe w ciągu około 24 godzin od ich izolacji i wyrażały ZO-1 w ich ciasnych połączeniach. (B i C) mikrofotografie kontrastu fazowego (faza; B) i fluorescencyjne (C) grupy komórek brodawkowatych nerki rosnących w warunkach hodowli komórkowej 4 dni po izolacji komórek; około 40% komórek brodawkowatych wyizolowanych od zwierząt obciążonych BrdU było komórkami utrzymującymi BrdU. (D i E) W ciągu pierwszych kilku dni hodowli większość komórek miała fenotyp nabłonka wyrażający ZO-1 w ich ścisłych złączach (D), ale niektóre komórki, oprócz ZO-1, również eksprymowały białka mezenchymalne, takie jak. aktyna mięśni gładkich (. SMA) (E). (F) Po ponad tygodniu hodowli w warunkach kontrolnych z 5% CO2 i 95% powietrza pokojowego, większość komórek miała kształt wrzeciona i silnie zabarwiona dla aktyny. Mięśni gładkich. (G) Jednakże, gdy komórki hodowano w warunkach niedotlenienia (5% CO2, 1,5% O2 i 93,5% N2), większość komórek zachowywała fenotyp nabłonka, z wyraźną ekspresją ZO-1. (H) Gdy hodowano je w standardowej kontrolnej pożywce hodowlanej na plastiku, większość komórek przylegała do naczynia hodowlanego, ale często tworzyły się agregaty komórek przypominające neurosfery. (I) Tendencja do agregacji komórek była znacznie zwiększona przez wzrost komórek przy braku surowic. Zdjęcie pokazuje 3-tygodniową kulturę z wieloma agregatami komórkowymi. (J) Wiele komórek wewnątrz agregatów było dodatnich dla nestinu. Skalowane pręty: 50 .m. Ponieważ w nerkach (6, 7), a także innych narządach, takich jak mięśnie (12), komórki pochodzące ze szpiku kostnego mogą się różnicować w komórki miąższu i uczestniczyć w konserwacji i naprawie narządów, zbadaliśmy, czy izolowane komórki brodawkowe zawierały populację komórki, które powstały w szpiku kostnym. Cytometria przepływowa z dokładnie zdyspergowanych komórek z brodawek 8 szczurów wykazała, że 3% komórek było dodatnich pod względem CD45, co wskazuje, że niewielka część izolowanych komórek była komórkami krwi.
[patrz też: kamil juraszek, porozumienie rodzicielskie wzór, bytovia hpu ]
[więcej w: kamil juraszek, laboratorium pruszcz gdański, barszcz czerwony magdy gessler ]
[przypisy: kamil juraszek, laboratorium pruszcz gdański, barszcz czerwony magdy gessler ]