Brodawka nerek jest niszą dla komórek macierzystych nerki dorosłych ad 7

W celu określenia, czy proliferacja komórek brodawkowatych obserwowana po niedokrwieniu dotyczyła komórek zatrzymujących BrdU, przejściowe niedokrwienie indukowano u dorosłych szczurów obciążonych BrdU, gdy były to młode. Następnie, 36 godzin po niedokrwieniu, nerki zebrano i 5. M przekroje ich brodawek zbadano pod kątem BrdU (FITC fluorescynian) i antygenu Ki-67 (rodaminy). W skrajnym prawym panelu A i widokach B wyższej mocy, połączone obrazy pokazują, że wiele komórek zatrzymujących BrdU zaczęło cyklować po niedokrwieniu. Skalowane pręty: 50 .m. Wstrzyknięcie śródnaczyniowe komórek brodawkowatych. Jeśli komórki nerki nerki uczestniczą w naprawie nerek, komórki te lub ich potomstwo powinno być zdolne do migracji i włączenia do innych części nerki. Aby to przetestować, wyznakowaliśmy komórki brodawkowe nerki hodowane in vitro z barwnikiem fluorescencyjnym PKH26 i wstrzyknięto je do podtorebkowego obszaru lewej nerki (23). Siedem dni później obie nerki zebrano i skrawki analizowano pod kątem obecności wyznakowanych komórek. W pięciu takich eksperymentach wyznakowane komórki wykryto tylko w nerce, której wstrzyknięto, w której grupy komórek często koncentrowały się w samoograniczającym się guzie w obszarze podtorebkowym lub korze nerek (nie pokazano). Jednak komórki rozprzestrzeniają się również na inne części nerki, takie jak rdzenia, jak pokazano w reprezentatywnym eksperymencie przedstawionym na rycinie 10. Należy zauważyć, że niektóre wyznakowane komórki (rodamina) były obecne w śródmiąższu nerkowym (Figura 10B, strzałki), ale inne komórki znajdowały się wewnątrz kanalików (Figura 10, B) D, zidentyfikowane przez zabarwienie kolagenu IV w ich błonie podstawnej (FITC fluorescyna). Rycina 10 Wstrzyknięcie dopłucnej nerek komórek brodawkowatych nerki. (A_D) Brodowate komórki znakowano PKH26 (rodaminą) i wstrzykiwano do przestrzeni podtorebkowej. Siedem dni później, sekcje o grubości 3 .m wykazały, że wiele komórek rozproszyło się do rdzenia nerkowego (A). Niektóre komórki znajdowały się w przestrzeni śródmiąższowej (strzałki w B), ale wiele z nich wbudowano w kanaliki (groty strzałek, B_D), które są podkreślone przez barwienie kolagenu IV (FITC) w ich błonach piwnicznych. Skalowane pręty: 50 .m. Dyskusja Nasze wyniki wskazują, że dorosła brodawka nerkowa zawiera dużą liczbę wolno cyklicznych komórek (tj. Komórek zatrzymujących BrdU), które utrzymują się przez całe życie zwierzęcia, ale szybko wchodzą do cyklu komórkowego i znikają z brodawki podczas odzyskiwania z przejściowego epizodu niedokrwienie, co sugeruje, że te komórki uczestniczą w naprawie nerek. Zniknięcia komórek z brodawki nie można wytłumaczyć ich śmiercią w odpowiedzi na niedokrwienie; apoptoza była nieobecna w brodawce, ale występowała obficie w innych regionach nerkowych po niedokrwieniu. Sugeruje to, że podobnie jak w innych narządach (10), proliferujące komórki mogą migrować w stronę maksymalnego uszkodzenia (tj. Rdzenia). Ponadto, komórki brodawczakowe nerki hodowane in vitro były zdolne do włączenia do innych części miąższu nerek, w tym kanalików nerkowych. Izolacja i hodowla in vitro komórek brodawkowatych pozwoliły na wyprowadzenie klonów zdolnych do generowania więcej niż jednego typu komórek, które podobnie jak metanonalne mezenchymalne komórki macierzyste (13), wykazały niezwykłą plastyczność i koekspresję markerów nabłonkowych i mezenchymalnych. Co więcej, komórki były zdolne do tworzenia kulek, charakterystycznych dla wielu specyficznych dla narządów dorosłych komórek macierzystych in vitro (15. 17). Jako agregat, dane te wskazują, że komórki macierzyste nerki dorosłych znajdują się w brodawki. Chociaż wykazaliśmy, że wyizolowane komórki brodawkowe nerki były pluripotencjalne, a komórki zatrzymujące BrdU były zlokalizowane w brodawki, frakcja tych komórek brodawkowatych nerki, które mogą być komórkami macierzystymi, jest nieznana. Kilka problemów technicznych ograniczyło naszą zdolność do utożsamiania komórek macierzystych z komórkami utrzymującymi BrdU, w tym problemy związane z włączeniem BrdU lub jego detekcją w komórkach, które go zatrzymują. Po pierwsze, obecnie nie jest możliwe wykazanie, że pluripotencjalna komórka in vitro jest również niskokaloryczną komórką in vivo, ponieważ wykrywanie BrdU jest procedurą destrukcyjną. Po drugie, mało prawdopodobne jest, aby metoda znakowania BrdU wykryła wszystkie komórki macierzyste, ponieważ BrdU obejmuje tylko podczas fazy S cyklu komórkowego i tylko wtedy, gdy wszystkie komórki byłyby synchroniczne, oczekiwalibyśmy, że będą one jednakowo znakowane. Co więcej, nie znamy długości cyklu w tych komórkach, a badania innych komórek macierzystych wykazały, że ich cykl komórkowy wydłuża się w miarę dojrzewania narządu (24). Tak więc istnieje zbyt wiele nieznanych czynników do przewidzenia z jakimkolwiek stopniem dokładności frakcji komórek macierzystych, które byłyby znakowane krótkim impulsem BrdU i jak wiele komórek brodawkowatych jest komórkami macierzystymi
[patrz też: jak radzić sobie po rozstaniu, zielone koktajle przepisy, porozumienie rodzicielskie wzór ]
[patrz też: narodowy fundusz zdrowia sanatorium, dlaczego ziewanie jest zaraźliwe, bytovia bytów ]
[więcej w: narodowy fundusz zdrowia sanatorium, dlaczego ziewanie jest zaraźliwe, bytovia bytów ]